流產(chǎn)性轉(zhuǎn)錄本（Abortive transcript,AT）是指在流產(chǎn)性起始階段產(chǎn)生的一類長度在2-19nt范圍內(nèi)的特殊非編碼RNA。流產(chǎn)性起始普遍發(fā)生在機(jī)體內(nèi)。在轉(zhuǎn)錄起始階段RNA聚合酶不能從啟動(dòng)子區(qū)域逃離,而是重新、反復(fù)地合成＜10nt片段大小的RNA,直到合成＞10nt的小片段RNA片段時(shí)RNA聚合酶才能發(fā)揮真正的轉(zhuǎn)錄作用。AT被高頻率的合成和釋放必然具有重要的生物學(xué)意義。但目前存在的問題在于AT片段長度集中在10nt以下難以進(jìn)行定性和定量分析。為了解決這一問題,本研究利用堿基堆積雜交法技術(shù)和Toehold介導(dǎo)的鏈置換反應(yīng)方法有效地實(shí)現(xiàn)短片段RNA的定量檢測。CA125蛋白已經(jīng)被確定為多種癌癥的生物標(biāo)志物,表達(dá)CA125蛋白的基因muc16在轉(zhuǎn)錄起始階段必然會(huì)釋放大量相關(guān)的AT,由此muc16基因的AT可能成為一種潛在的腫瘤標(biāo)志物,可以用于宮頸癌等癌癥的檢測。本研究將為開發(fā)muc16相關(guān)AT提供技術(shù)支持,同時(shí)也為開發(fā)其它基因的AT成為疾病的早期診斷的新型標(biāo)志物提供研究思路和技術(shù)支持。本文主要研究內(nèi)容和結(jié)論如下:（1）短鏈RNA對堿基堆積雜交的影響研究發(fā)現(xiàn),在BSH-ABC模式下M... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞
第一章 緒論
    1.1 非編碼RNA及流產(chǎn)性轉(zhuǎn)錄本研究進(jìn)展
        1.1.1 流產(chǎn)性轉(zhuǎn)錄本的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 影響流產(chǎn)性起始的因素
        1.1.3 流產(chǎn)性轉(zhuǎn)錄本的生物學(xué)功能
    1.2 當(dāng)前短鏈RNA的檢測技術(shù)及其局限性
    1.3 非編碼RNA與腫瘤標(biāo)志物
    1.4 流產(chǎn)性轉(zhuǎn)錄本在早期癌癥檢測中的優(yōu)勢
    1.5 短鏈核酸檢測的方案
        1.5.1 堿基堆積雜交技術(shù)
        1.5.2 鏈置換反應(yīng)技術(shù)
    1.6 研究的目的和意義
    1.7 研究方案
第二章 堿基堆積雜交檢測muc16-AT條件優(yōu)化
    2.1 研究思路及技術(shù)概要
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 寡核酸序列
    2.3 溶液配制
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 ABC模式
        2.4.2 ABCD模式
    2.5 結(jié)果與分析
        2.5.1 不同濃度Mg~(2+)對ABC模式的影響
        2.5.2 不同濃度B對堿基堆積雜交(ABC)的影響
        2.5.3 不同濃度Mg~(2+)對ABCD模式的影響
        2.5.4 不同濃度梯度AT對 BSH(ABCD)的影響
    2.6 本章小結(jié)
第三章 Toehold介導(dǎo)的鏈置換反應(yīng)檢測muc16-AT條件優(yōu)化
    3.1 研究思路及技術(shù)概要
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 試劑與材料
        3.2.2 寡核酸序列信息
        3.2.3 溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 AT對溶解曲線的影響
        3.3.2 堿基堆積雜交對鏈置換反應(yīng)的影響
        3.3.3 不同Na~+/Mg~(2+)濃度在AT存在下對鏈置換速率的影響
        3.3.4 不同長度Toehold對鏈置換反應(yīng)速率的影響
        3.3.5 基于鏈置換反應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 AT對溶解曲線的影響
        3.4.2 堿基堆積雜交對鏈置換反應(yīng)的影響
        3.4.3 不同Na~+/Mg~(2+)濃度在AT存在下對鏈置換反應(yīng)速率的影響
        3.4.4 不同長度Toehold對鏈置換反應(yīng)速率的影響
        3.4.5 構(gòu)建不同濃度AT與鏈置換初始反應(yīng)速率標(biāo)準(zhǔn)曲線
    3.5 本章小結(jié)
第四章 癌細(xì)胞中muc16 基因相關(guān)AT的檢測及分析
    4.1 材料及儀器
        4.1.1 細(xì)胞系
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 RNA提取
        4.2.3 堿基堆積雜交檢測AT
        4.2.4 鏈置換反應(yīng)檢測AT
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 Small RNA提取
        4.3.2 堿基堆積雜交檢測細(xì)胞中的AT
        4.3.3 鏈置換反應(yīng)檢測細(xì)胞中的AT
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]非編碼RNA對腫瘤的調(diào)控機(jī)制[J]. 羅子華,于曉峰,鄒健.  國際消化病雜志. 2013(02)

博士論文
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[2]應(yīng)用單個(gè)鎖核酸修飾的探針提高對非互補(bǔ)雜交識別能力的研究[D]. 樸賢玉.中國醫(yī)科大學(xué) 2009

碩士論文
[1]高性能miRNA芯片技術(shù)SHUT assay平臺(tái)特異性研究[D]. 李麗詩.廣西師范大學(xué) 2013



本文編號：3721622