本文關(guān)鍵詞：黃芩苷上調(diào)FUT4表達及促進胚胎著床機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的:1.糖基化在決定子宮內(nèi)膜對胚胎的容受能力方面發(fā)揮重要作用。2.巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅳ(FUT4)在哺乳動物子宮內(nèi)膜呈階段特異性表達,并被認為是子宮內(nèi)膜容受性標志物。3.黃芩苷(Baicalin)是從中藥黃芩(Scutellaria Baicalensis)中提取的一種黃酮類單體,具有改善哺乳動物生殖的功能。4.然而,黃芩苷在胚胎與子宮內(nèi)膜黏附過程中的調(diào)節(jié)作用是否與子宮內(nèi)膜FUT4表達有關(guān)目前尚不清楚。5.本研究旨在探討黃芩苷對胚胎黏附和著床的影響及其糖生物學作用機制,進一步揭示黃芩苷對哺乳動物胚胎著床的重要調(diào)控作用。方法:1.利用RT-PCR,Western blot和免疫熒光技術(shù)檢測黃芩苷對人子宮內(nèi)膜RL95-2細胞FUT4 mRNA和蛋白表達影響。2.采用Western blot技術(shù)檢測正常對照(control)、二甲基亞砜(DMSO)、黃芩苷(baicalin)、Dickkopf 1(DKK1)、黃芩苷聯(lián)合DKK1、轉(zhuǎn)染對照(vector)、β-連環(huán)蛋白干擾(si-β-catenin)、黃芩苷聯(lián)合si-β-catenin等8組Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵分子磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK3β),GSK3β,β-catenin和特異蛋白5(sp5)表達水平。3.為探究sp5如何調(diào)節(jié)fut4表達,我們應(yīng)用rt-pcr和westernblot技術(shù)檢測sh-sp5,sp1-cdna及其共轉(zhuǎn)染對rl95-2細胞fut4mrna和蛋白表達影響。4.利用子宮內(nèi)膜rl95-2細胞和胚胎jar細胞共培養(yǎng)建立的體外植入模型,檢測了包括正常對照、dmso、baicalin(3,6μg/ml)、sh-sp5等15組的胚胎黏附率。5.采用rt-pcr,westernblot和免疫組化技術(shù)進一步檢測經(jīng)黃芩苷和黃芩水煎液灌胃處理的昆明小鼠在孕第4天子宮內(nèi)膜sp5和fut4mrna和蛋白表達情況。6.孕第8天計算正常對照、生理鹽水、黃芩苷和黃芩水煎液組的小鼠胚胎著床數(shù)。結(jié)果:1.黃芩苷促進人子宮內(nèi)膜細胞fut4mrna和蛋白表達。rt-pcr和westernblot結(jié)果顯示,黃芩苷3μg/ml(p0.05)和6μg/ml(p0.01)能顯著提高rl95-2細胞fut4mrna和蛋白表達水平;免疫熒光技術(shù)檢測結(jié)果與rt-pcr和westernblot一致。2.黃芩苷活化人子宮內(nèi)膜細胞wnt/β-catenin/sp5信號通路。westernblot結(jié)果顯示,與正常對照組相比,黃芩苷(6μg/ml)能顯著提高rl95-2細胞p-gsk3β,β-catenin和sp5(p0.001)的表達水平;同時,黃芩苷能夠恢復(fù)dkk1和β-cateninsirna預(yù)處理的rl95-2細胞p-gsk3β,β-catenin和sp5的表達水平。3.sp5上調(diào)人子宮內(nèi)膜細胞fut4mrna和蛋白表達水平。rt-pcr和westernblot結(jié)果顯示,與對照組相比,sh-sp5(p0.001)、sp1-cdna(p0.01)和共轉(zhuǎn)染(p0.001)組fut4mrna和蛋白表達水平顯著降低。4.黃芩苷通過wnt/β-catenin/sp5信號通路上調(diào)fut4表達,促進子宮內(nèi)膜細胞與胚胎細胞的黏附。黏附實驗結(jié)果顯示,正常對照、dmso、sh-control和mock組之間的胚胎黏附率無顯著性差異;與對照組和dmso組相比,黃芩苷能顯著提高rl95-2細胞的胚胎黏附率;與轉(zhuǎn)染對照組相比,sh-sp5或sp1-cdna(p0.001)能顯著降低rl95-2細胞的胚胎黏附率;同時,黃芩苷能夠恢復(fù)sh-sp5或sp1-cdna預(yù)處理的rl95-2細胞的胚胎黏附率,但仍低于黃芩苷組;黃芩苷顯著增加共轉(zhuǎn)染組胚胎黏附率;進一步研究表明,黃芩苷能夠顯著反轉(zhuǎn)FUT4 siRNA導致的低胚胎黏附率。5.黃芩苷促進著床窗口期小鼠子宮內(nèi)膜SP5及FUT4 mRNA和蛋白表達。RT-PCR和Western blot揭示,與正常對照和生理鹽水組比較,黃芩苷和黃芩水煎液能顯著增加孕第4天小鼠子宮內(nèi)膜FUT4和SP5 mRNA及蛋白表達水平;同時,免疫組化結(jié)果顯示,黃芩水煎液組與正常對照組相比免疫染色較強,與黃芩苷組相比免疫染色較弱。6.黃芩苷提高小鼠妊娠成功率。與正常對照和生理鹽水組比較,黃芩苷(P0.01)和黃芩水煎液(P0.05)組胚胎著床率顯著增加。結(jié)論:1.黃芩苷上調(diào)人子宮內(nèi)膜細胞及小鼠子宮內(nèi)膜組織中FUT4 mRNA和蛋白表達水平。2.黃芩苷改善人子宮內(nèi)膜RL95-2細胞與人胚胎JAR細胞之間的黏附。3.黃芩苷促進小鼠胚胎植入。4.黃芩苷通過Wnt/β-catenin信號通路上調(diào)子宮內(nèi)膜FUT4表達,具有提高子宮內(nèi)膜容受性的作用。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 胚胎 子宮內(nèi)膜上皮細胞 FUT4 植入 β-catenin
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-33
• 結(jié)果33-40
• 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-48
• 文獻綜述48-58
• 參考文獻55-58
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況58-59
• 致謝59-60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊雪松;劉帥;燕秋;;人FUT4基因近端啟動子結(jié)構(gòu)的初步分析[J];中國生物化學與分子生物學報;2012年04期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張玉梅;黃芩苷上調(diào)FUT4表達及促進胚胎著床機制的研究[D];大連醫(yī)科大學;2015年

  本文關(guān)鍵詞：黃芩苷上調(diào)FUT4表達及促進胚胎著床機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：372096