目的:探討RNF20缺陷對肝細胞肝癌的細胞增殖、侵襲、遷移和DNA損傷修復(fù)的影響及其相關(guān)的作用機制。方法:1.穩(wěn)定低表達RNF20的SMMC-7721及Huh7肝癌細胞系的建立（1）針對RNF20基因設(shè)計3組短發(fā)夾RNA序列（RNF20-sh RNA1、RNF20-sh RNA2和RNF20-sh RNA3）;（2）構(gòu)建p Lent-U6-GFP-Puro-sh RNF20、p Lent-U6-GFP-Puro-sh Ctrl慢病毒載體;（3）包裝慢病毒,感染人肝癌細胞SMMC-7721和Huh7,熒光顯微鏡觀察其綠色熒光蛋白表達,經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選建立RNF20敲低的肝細胞肝癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。（4）采用實時熒光定量PCR技術(shù)、免疫熒光染色法和免疫印跡法分別鑒定細胞中RNF20 m RNA以及RNF20蛋白的表達。2.RNF20缺陷對肝癌細胞增殖、侵襲及遷移的影響及其機制（1）采用CCK-8、Brd U摻入實驗、平板克隆實驗、Transwell侵襲實驗、劃痕實驗檢測RNF20缺陷對肝癌細胞增殖、侵襲及遷移的影響;（2）采用免疫印跡法檢測RNF20缺陷對T-Akt及p-Akt蛋白的影響;（3... 

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【學位級別】：碩士

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前言
第一部分 穩(wěn)定低表達RNF20的SMMC-7721及Huh7 肝癌細胞系的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 SMMC-7721和Huh7 細胞中RNF20 mRNA表達情況
        2.2 RNF20 敲低效率的鑒定
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 RNF20 缺陷對肝癌細胞增殖、遷移和侵襲的影響及其機制
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 RNF20 缺陷對肝癌細胞增殖的影響
        2.2 RNF20 缺陷對肝癌細胞遷移及侵襲的影響
        2.3 RNF20 在肝癌細胞增殖和遷移中的作用機制
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 RNF20 缺陷對肝癌細胞DNA損傷修復(fù)的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 RNF20 缺陷對H2Bub1 的影響
        2.2 RNF20 缺陷對肝癌細胞DNA雙鏈斷裂修復(fù)的影響
        2.3 RNF20 缺陷對肝癌細胞同源重組修復(fù)的影響
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
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【參考文獻】：
期刊論文
[1]Biomarkers for the early diagnosis of hepatocellular carcinoma[J]. Nobuhiro Tsuchiya,Yu Sawada,Itaru Endo,Keigo Saito,Yasushi Uemura,Tetsuya Nakatsura.  World Journal of Gastroenterology. 2015(37)
[2]Decreased histone H2B monoubiquitination in malignant gastric carcinoma[J]. Zi-Jing Wang,Jing-Lin Yang,Yi-Ping Wang,Jiang-Yan Lou,Jie Chen,Cong Liu,Lian-Di Guo.  World Journal of Gastroenterology. 2013(44)



本文編號：3716018