目的:探討RNF20缺陷對(duì)肝細(xì)胞肝癌的細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和DNA損傷修復(fù)的影響及其相關(guān)的作用機(jī)制。方法:1.穩(wěn)定低表達(dá)RNF20的SMMC-7721及Huh7肝癌細(xì)胞系的建立（1）針對(duì)RNF20基因設(shè)計(jì)3組短發(fā)夾RNA序列（RNF20-sh RNA1、RNF20-sh RNA2和RNF20-sh RNA3）;（2）構(gòu)建p Lent-U6-GFP-Puro-sh RNF20、p Lent-U6-GFP-Puro-sh Ctrl慢病毒載體;（3）包裝慢病毒,感染人肝癌細(xì)胞SMMC-7721和Huh7,熒光顯微鏡觀察其綠色熒光蛋白表達(dá),經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選建立RNF20敲低的肝細(xì)胞肝癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。（4）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、免疫熒光染色法和免疫印跡法分別鑒定細(xì)胞中RNF20 m RNA以及RNF20蛋白的表達(dá)。2.RNF20缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移的影響及其機(jī)制（1）采用CCK-8、Brd U摻入實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RNF20缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移的影響;（2）采用免疫印跡法檢測(cè)RNF20缺陷對(duì)T-Akt及p-Akt蛋白的影響;（3... 

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
常用縮寫詞中英文對(duì)照表
前言
第一部分 穩(wěn)定低表達(dá)RNF20的SMMC-7721及Huh7 肝癌細(xì)胞系的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 SMMC-7721和Huh7 細(xì)胞中RNF20 mRNA表達(dá)情況
        2.2 RNF20 敲低效率的鑒定
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 RNF20 缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及其機(jī)制
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 RNF20 缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響
        2.2 RNF20 缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞遷移及侵襲的影響
        2.3 RNF20 在肝癌細(xì)胞增殖和遷移中的作用機(jī)制
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 RNF20 缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞DNA損傷修復(fù)的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 RNF20 缺陷對(duì)H2Bub1 的影響
        2.2 RNF20 缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞DNA雙鏈斷裂修復(fù)的影響
        2.3 RNF20 缺陷對(duì)肝癌細(xì)胞同源重組修復(fù)的影響
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Biomarkers for the early diagnosis of hepatocellular carcinoma[J]. Nobuhiro Tsuchiya,Yu Sawada,Itaru Endo,Keigo Saito,Yasushi Uemura,Tetsuya Nakatsura.  World Journal of Gastroenterology. 2015(37)
[2]Decreased histone H2B monoubiquitination in malignant gastric carcinoma[J]. Zi-Jing Wang,Jing-Lin Yang,Yi-Ping Wang,Jiang-Yan Lou,Jie Chen,Cong Liu,Lian-Di Guo.  World Journal of Gastroenterology. 2013(44)



本文編號(hào)：3716018