目的:本研究選取副溶血弧菌T6SS1（VP1386-1414）上若干操縱子（VP1388-1390,VP1393-1399,VP1400-1405及VP1409-1406）的首基因和T6SS2（VPA1024-1046）上各操縱子（VPA1027-1024,VPA1043-1028及VPA1044-1046）的首基因為研究對象,利用表型實驗和分子生物學實驗研究Lys R型轉錄調節(jié)因子CalR對T6SSs的轉錄調控機制,為我們進一步理解副溶血弧菌的致病機制提供一定的理論基礎。方法:1.抑菌實驗:選取本課題組前期構建的副溶血弧菌野生株、缺陷株及回補株菌體（WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δcal R）。將等量WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δcal R分別與大腸桿菌S17-p BAD33按特定比例混和后,置37°C下靜置共孵育4 h,用不同濃度的抗生素篩選,以0 h的菌落計數(shù)為參照,觀察各菌株4 h后的菌量變化,從而分析CalR是否調控副溶血弧菌的抑菌能力。2.細胞粘附實驗:取等量WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δca... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫索引
1 引言
    1.1 副溶血弧菌的生物學特性及其危害
    1.2 副溶血弧菌主要毒力因子
        1.2.1 溶血素
        1.2.2 Ⅲ型分泌系統(tǒng)
        1.2.3 Ⅵ型分泌系統(tǒng)
        1.2.4 粘附因子
    1.3 轉錄調控因子CalR的研究進展
        1.3.1 CalR在其他菌中的同源蛋白研究現(xiàn)狀
        1.3.2 副溶血弧菌中CalR的研究概況
    1.4 研究目的、內容及路線設計
        1.4.1 研究目的：
        1.4.2 研究內容：
        1.4.3 總設計路線：
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和質粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要溶液
        2.1.5 本文所用引物
    2.2 方法
        2.2.1 副溶血弧菌對大腸桿菌的抑菌表型實驗
        2.2.2 副溶血弧菌對Hela細胞的粘附表型實驗
        2.2.3 LacZ報告基因融合實驗
        2.2.4 引物延伸（Primer Extension）及實時定量RT-PCR（qRT-PCR）
        2.2.5 凝膠阻滯實驗（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA）
        2.2.6 競爭性凝膠阻滯實驗
3 結果與討論
    3.1 副溶血弧菌CalR直接激活T6SS1的表達
        3.1.1 抑菌表型實驗
        3.1.2 CalR能激活T6SS1的啟動子活性
        3.1.3 CalR能直接和T6SS1的基因相互作用
        3.1.4 討論
    3.2 副溶血弧菌CalR直接激活T6SS2的表達
        3.2.1 副溶血弧菌對Hela細胞的粘附表型實驗
        3.2.2 CalR能激活T6SS2的轉錄
        3.2.3 CalR能激活T6SS2的基因的啟動子區(qū)域
        3.2.4 CalR能直接激活T6SS2的表達
        3.2.5 CalR競爭性拮抗H-NS與靶基因的相互結合
        3.2.6 討論
4 主要結論及展望
    4.1 主要結論
    4.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文及學術交流


【參考文獻】：
期刊論文
[1]副溶血弧菌calR的基因敲除株與回補株構建[J]. 侯書寧,孟彥言,朱文君,張凌宇,周冬生,張義全,黃新祥.  軍事醫(yī)學. 2016(05)
[2]H-NS蛋白對副溶血弧菌hcp1的轉錄調控[J]. 王潔,董新波,高麗曉,周冬生,殷喆,張義全.  微生物學報. 2016(01)
[3]耶爾森菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)研究進展[J]. 陽芬,楊秋林,杜宗敏.  生物技術通訊. 2013(03)
[4]副溶血弧菌耐熱性直接溶血素的研究進展[J]. 李巧蘋,劉曉紅,蔣德源.  福建畜牧獸醫(yī). 2010(06)
[5]副溶血弧菌毒力因子及其致病機理研究進展[J]. 楊振泉,焦新安.  中國人獸共患病學報. 2008(11)
[6]副溶血性弧菌食物中毒菌株的血清型、耐藥性及基因檢測[J]. 程蘇云,翁景清,林香娟,任錦玉.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2002(02)
[7]1994～2000年579株副溶血性弧菌腸道感染檢測回顧[J]. 王紅旗,夏光明,李景云,宋敏,崔恩博,鮑春梅.  肝臟. 2001(S1)



本文編號：3706615