目的:本研究選取副溶血弧菌T6SS1（VP1386-1414）上若干操縱子（VP1388-1390,VP1393-1399,VP1400-1405及VP1409-1406）的首基因和T6SS2（VPA1024-1046）上各操縱子（VPA1027-1024,VPA1043-1028及VPA1044-1046）的首基因?yàn)檠芯繉?duì)象,利用表型實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究Lys R型轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CalR對(duì)T6SSs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,為我們進(jìn)一步理解副溶血弧菌的致病機(jī)制提供一定的理論基礎(chǔ)。方法:1.抑菌實(shí)驗(yàn):選取本課題組前期構(gòu)建的副溶血弧菌野生株、缺陷株及回補(bǔ)株菌體（WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δcal R）。將等量WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δcal R分別與大腸桿菌S17-p BAD33按特定比例混和后,置37°C下靜置共孵育4 h,用不同濃度的抗生素篩選,以0 h的菌落計(jì)數(shù)為參照,觀察各菌株4 h后的菌量變化,從而分析CalR是否調(diào)控副溶血弧菌的抑菌能力。2.細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn):取等量WT-p BAD33,Δcal R-p BAD33及C-Δca... 

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫索引
1 引言
    1.1 副溶血弧菌的生物學(xué)特性及其危害
    1.2 副溶血弧菌主要毒力因子
        1.2.1 溶血素
        1.2.2 Ⅲ型分泌系統(tǒng)
        1.2.3 Ⅵ型分泌系統(tǒng)
        1.2.4 粘附因子
    1.3 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子CalR的研究進(jìn)展
        1.3.1 CalR在其他菌中的同源蛋白研究現(xiàn)狀
        1.3.2 副溶血弧菌中CalR的研究概況
    1.4 研究目的、內(nèi)容及路線設(shè)計(jì)
        1.4.1 研究目的：
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容：
        1.4.3 總設(shè)計(jì)路線：
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要溶液
        2.1.5 本文所用引物
    2.2 方法
        2.2.1 副溶血弧菌對(duì)大腸桿菌的抑菌表型實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 副溶血弧菌對(duì)Hela細(xì)胞的粘附表型實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 LacZ報(bào)告基因融合實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 引物延伸（Primer Extension）及實(shí)時(shí)定量RT-PCR（qRT-PCR）
        2.2.5 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA）
        2.2.6 競(jìng)爭(zhēng)性凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與討論
    3.1 副溶血弧菌CalR直接激活T6SS1的表達(dá)
        3.1.1 抑菌表型實(shí)驗(yàn)
        3.1.2 CalR能激活T6SS1的啟動(dòng)子活性
        3.1.3 CalR能直接和T6SS1的基因相互作用
        3.1.4 討論
    3.2 副溶血弧菌CalR直接激活T6SS2的表達(dá)
        3.2.1 副溶血弧菌對(duì)Hela細(xì)胞的粘附表型實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 CalR能激活T6SS2的轉(zhuǎn)錄
        3.2.3 CalR能激活T6SS2的基因的啟動(dòng)子區(qū)域
        3.2.4 CalR能直接激活T6SS2的表達(dá)
        3.2.5 CalR競(jìng)爭(zhēng)性拮抗H-NS與靶基因的相互結(jié)合
        3.2.6 討論
4 主要結(jié)論及展望
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及學(xué)術(shù)交流


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3706615