研究目的:神經(jīng)病理性疼痛的一種共同的內(nèi)在機制是損傷或受到影響的神經(jīng)發(fā)生炎癥。這種炎癥反應引起一連串的事件導致先天免疫細胞集中到損傷組織附近并被激活。包括細胞因子,神經(jīng)營養(yǎng)因子和趨化因子在內(nèi)的免疫活性物質(zhì)的釋放引起局部反應,并進一步導致更廣泛的免疫反應。外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的致敏是神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生和維持的主要原因,而炎癥免疫機制是調(diào)節(jié)這些環(huán)節(jié)的關鍵。神經(jīng)病理性疼痛在中醫(yī)辨病辨證中歸于“痹證”范疇,中藥復方身痛逐瘀湯具有身痛逐瘀湯具有行氣活血逐瘀,祛風除濕止痛之功效,作為治療痹證尤其是瘀血痹的代表方。現(xiàn)代藥理研究證明,全方具有顯著的抗炎,鎮(zhèn)痛,改善微循環(huán)以及抗變態(tài)反應作用。基于二代測序技術的高通量測序（RNA-Seq）技術是目前應用最廣泛的轉錄組測序技術,能快速獲得檢測樣本的全部遺傳信息。RNA-Seq具有實驗成本低以及高通量特性等優(yōu)點,可用來研究基因的結構和功能,鑒定基因表達量的變化,探究調(diào)控的可變剪接模式等。在生命科學領域,該技術已被用來探尋疾病的發(fā)生機制、臨床的診斷以及藥物藥理學研究等。因此本研究將基于RNA-Seq技術探究身痛逐瘀湯在治療神經(jīng)病理性疼痛中潛在的作用靶點,為該疾病治療... 

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
前言
1.材料
    1.1 實驗細胞株
    1.2 實驗試劑及耗材
    1.3 實驗儀器
    1.4 主要試劑配置及實驗準備
2.方法
    (一)文獻檢索
    (二)細胞實驗前準備和基本操作
    (三)熒光定量q-PCR、Western-blot以及MTT法檢測法
    2.1 克隆與質(zhì)粒的構建
    2.2 轉染
    2.3 基因過表達的評估
    2.4 RNA提取、測序
    2.5 RNA-seq數(shù)據(jù)處理和校準
    2.6 差異表達基因(DEG)分析
    2.7 可變剪接分析
    2.8 DEGs和AS事件的反轉錄qPCR驗證
    2.9 功能富集分析
3.實驗結果
    3.1 檢索結果
    3.2 過表達STAU1促進細胞增殖
        3.2.1 過表達載體轉染GFP熒光表達
        3.2.2 Q-PCR檢測結果
        3.2.3 Western blot結果
        3.2.4 細胞增殖結果
    3.3 RNA-seq分析STAU1過表達的轉錄調(diào)控
        3.3.1 制備cDNA文庫
        3.3.2 FPKM量化STAU1的表達值
        3.3.3 樣本間聚類分析
        3.3.4 構建MA plot圖
    3.4 STAU1調(diào)節(jié)富集在炎癥和免疫反應相關基因的表達
        3.4.1 對差異表達基因(DEGs)作heapmap分析
        3.4.2 GO富集分析
        3.4.3 KEGG富集分析
        3.4.4 DEGs的層次聚類圖
        3.4.5 四個差異表達基因IFIT2、OASL、IFIT3、CCL2的reads分布圖
    3.5 STAU1能正調(diào)控HeLa細胞中IFIT2、OASL、IFIT3的表達,以及負調(diào)控CCL2基因表達
        3.5.1 RNA-seq中基因表達量檢測
        3.5.2 Q-PCR驗證結果
    3.6 STAU1調(diào)節(jié)富集于神經(jīng)生長因子受體信號通路中基因的可變剪接
        3.6.1 樣本外顯子檢出情況和剪接位點分析
        3.6.2 樣本中AS事件的檢出情況
        3.6.3 顯著差異AS事件數(shù)量和類型
        3.6.4 檢測同時發(fā)生RASG和DEG的基因
        3.6.5 可變剪接基因的GO和KEGG pathway富集性分析
    3.7 STAU1調(diào)控HeLa細胞中PLEKHG2、ARHGEF11、FGFR1、PDGFB、FGFR4、RALGDS的可變剪接
        3.7.1 可變剪接事件測序結果
        3.7.2 熒光定量Q-PCR檢測
4.討論
結語
參考文獻
附錄 基于RNA-seq技術在RNA結合蛋白中的研究進展
    參考文獻
附表
致謝



本文編號：3686712