目的:1.探討miR-31對(duì)結(jié)腸炎的促進(jìn)作用是否通過靶向SATB2。2.使用miR-31過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠,探討miR-31促進(jìn)結(jié)腸炎的分子機(jī)制。方法:1.SATB2敲低實(shí)驗(yàn):將人結(jié)腸上皮細(xì)胞HCT 116分為control組、miR-31過表達(dá)組（轉(zhuǎn)染miR-31 mimic,使miR-31過表達(dá)）、miR-31敲低組（轉(zhuǎn)染miR-31 inhibiror,抑制miR-31的表達(dá)）、si-SATB2組（轉(zhuǎn)染SATB2 siRNA,抑制SATB2的表達(dá)）。使用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后將細(xì)胞放入CO2孵箱中,孵育72h后收取細(xì)胞。qRT-PCR檢測siRNA的轉(zhuǎn)染效率和最佳轉(zhuǎn)染濃度;Western Blot檢測4組細(xì)胞SATB2、NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表達(dá)。2.SATB2過表達(dá)實(shí)驗(yàn):將人結(jié)腸上皮細(xì)胞HCT 116分為control組、pEXP-RB-Mam組（轉(zhuǎn)染空載體）、pEXP-RB-Mam-SATB2組（轉(zhuǎn)染SATB2過表達(dá)質(zhì)粒）,待細(xì)胞貼壁后使用lip2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染后將細(xì)胞放入CO₂孵箱中孵育,6h后進(jìn)行換液,72h后收集細(xì)胞。Weste... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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前言
第一部分 SATB2對(duì)miR-31 促進(jìn)結(jié)腸炎的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)分組
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 SATB2 siRNA的轉(zhuǎn)染效率以及最佳轉(zhuǎn)染濃度
        2.2 Western Blot檢測HCT116 細(xì)胞中SATB2 蛋白的表達(dá)
        2.3 Western Blot檢測HCT116 細(xì)胞中炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.4 Western Blot檢測SATB2 過表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率
        2.5 SATB2 過表達(dá)對(duì)HCT116 細(xì)胞炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 miR-31 通過調(diào)節(jié)TLR4/NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)腸炎發(fā)生
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)分組
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 Western Blot檢測小鼠結(jié)腸組織SATB2 蛋白的表達(dá)
        2.2 IHC檢測小鼠結(jié)腸組織SATB2 蛋白的表達(dá)
        2.3 Western Blot檢測小鼠結(jié)腸組織TLR4、NF-ΚB蛋白的表達(dá)
        2.4 IHC檢測小鼠結(jié)腸組織TLR4、NF-κB蛋白的表達(dá)
        2.5 小鼠結(jié)腸組織中COX-2、TNF-α、iNOS蛋白的表達(dá)
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 miR-31 對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)分組
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞的凋亡指數(shù)
        2.2 Western Blot檢測小鼠結(jié)腸組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2 的表達(dá)
        2.3 IHC檢測小鼠結(jié)腸組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2 的表達(dá)
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡介



本文編號(hào)：3674007