目的:探究合歡花減輕APAP誘導的急性肝損傷的有效成分及其作用機制,為其在治療APAP誘導的急性肝損傷方面的開發(fā)應用提供科學依據(jù)。方法:以人正常肝細胞L-02細胞為受試對象,采用MTT法檢測合歡花不同部位提取物對APAP損傷的L-02細胞活力的影響,篩選有效部位。采用液質(zhì)聯(lián)用技術分析鑒定有效部位中的化學成分,選擇主要成分進行活性篩選,并結(jié)合相關文獻,確定有效成分。建立APAP急性肝損傷的BALB/c小鼠模型,灌胃給予小鼠不同濃度的有效成分,驗證有效成分的體內(nèi)抗急性肝損傷作用。觀察有效成分對小鼠肝臟外觀、臟器系數(shù)的影響;蘇木精-伊紅（H＆E）染色判斷肝臟組織的病理生理結(jié)構(gòu)變化;生化試劑盒檢測小鼠血清中ALT、AST和LDH的含量,及小鼠肝組織勻漿中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和MDA的含量;免疫組化染色檢測小鼠肝臟中活性氧（ROS）、F4/80的變化;酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）測定小鼠血清中白細胞介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量。建立APAP誘導的L-02細胞損傷模型,并設置對照組（Control）、藥物組（Que）、模型組（APAP）和治療組（A... 

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
研究思路與技術路線
前言
第一章 文獻綜述
    1 藥物性肝損傷
        1.1 概述
        1.2 APAP的肝毒性
        1.3 APAP肝毒性機制
        1.4 治療對策
    2 合歡花
        2.1 合歡花化學成分
        2.2 合歡花藥理作用研究
        2.3 總結(jié)
    3 槲皮苷
        3.1 抗氧化作用
        3.2 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用
        3.3 對心血管系統(tǒng)作用
        3.4 抗炎鎮(zhèn)痛作用
        3.5 抗腫瘤作用
        3.6 抗病毒作用
        3.7 抗糖尿病作用
        3.8 其他作用
        3.9 總結(jié)
    4 本論文研究意義
第二章 合歡花減輕APAP誘導的L-02 細胞損傷有效物質(zhì)的篩選
    1 實驗材料
        1.1 實驗藥材
        1.2 細胞株
        1.3 實驗試劑
        1.4 實驗儀器
        1.5 主要試劑的配置
    2 實驗方法
        2.1 合歡花各部位的萃取分離
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 合歡花各部位對L-02 細胞活性的影響
        2.4 合歡花減輕APAP誘導的L-02 細胞損傷有效部位的篩選
        2.5 合歡花有效部位化學成分分析
        2.6 槲皮苷的分離純化
        2.7 槲皮苷減輕APAP誘導的L-02 細胞損傷活性篩選
        2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 合歡花各部位的萃取分離
        3.2 合歡花各部位活性篩選
        3.3 合歡花有效部位化學成分LC-MS分析
        3.4 槲皮苷的鑒定
        3.5 槲皮苷的活性篩選
    4 討論
第三章 槲皮苷減輕APAP誘導的小鼠急性肝損傷藥效學研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 小鼠分組及給藥
        2.2 取材
        2.3 組織樣本石蠟包埋與切片
        2.4 肝臟組織的H&E染色
        2.5 冰凍切片免疫組化實驗
        2.6 免疫組化實驗
        2.7 小鼠血清中ALT、AST和 LDH水平的測定
        2.8 小鼠血清中IL-6和TNF-α水平的測定
        2.9 小鼠肝臟中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和 MDA水平的測定
    3.實驗結(jié)果
        3.1 槲皮苷對小鼠肝臟外觀及肝臟臟器系數(shù)的影響
        3.2 槲皮苷對小鼠肝臟組織病理學的影響
        3.3 槲皮苷對血清中ALT、AST和 LDH水平的影響
        3.4 槲皮苷對小鼠炎癥水平的影響
        3.5 槲皮苷對小鼠氧化應激水平的影響
    4 討論
第四章 槲皮苷減輕APAP誘導的L-02 細胞損傷作用機制研究
    1 實驗材料
        1.1 細胞株
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
        1.4 主要試劑的配置
    2 實驗方法
        2.1 細胞的培養(yǎng)
        2.2 細胞內(nèi)ROS水平的測定
        2.3 細胞線粒體內(nèi)NADH脫氫酶活性的測定
        2.4 魚藤酮對槲皮苷藥效影響的測定
        2.5 蛋白免疫印跡法檢測L-02 細胞中NADH脫氫酶的表達
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 槲皮苷對細胞內(nèi)ROS水平的影響
        3.2 槲皮苷對細胞線粒體中NADH脫氫酶活性的影響
        3.3 魚藤酮對槲皮苷藥效的影響
        3.4 槲皮苷對NADH脫氫酶表達的影響
    4 討論
結(jié)語與創(chuàng)新
參考文獻
研究生在讀期間主要研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3671176