目的:探究合歡花減輕APAP誘導(dǎo)的急性肝損傷的有效成分及其作用機(jī)制,為其在治療APAP誘導(dǎo)的急性肝損傷方面的開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法:以人正常肝細(xì)胞L-02細(xì)胞為受試對(duì)象,采用MTT法檢測(cè)合歡花不同部位提取物對(duì)APAP損傷的L-02細(xì)胞活力的影響,篩選有效部位。采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析鑒定有效部位中的化學(xué)成分,選擇主要成分進(jìn)行活性篩選,并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),確定有效成分。建立APAP急性肝損傷的BALB/c小鼠模型,灌胃給予小鼠不同濃度的有效成分,驗(yàn)證有效成分的體內(nèi)抗急性肝損傷作用。觀察有效成分對(duì)小鼠肝臟外觀、臟器系數(shù)的影響;蘇木精-伊紅（H＆E）染色判斷肝臟組織的病理生理結(jié)構(gòu)變化;生化試劑盒檢測(cè)小鼠血清中ALT、AST和LDH的含量,及小鼠肝組織勻漿中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和MDA的含量;免疫組化染色檢測(cè)小鼠肝臟中活性氧（ROS）、F4/80的變化;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）測(cè)定小鼠血清中白細(xì)胞介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量。建立APAP誘導(dǎo)的L-02細(xì)胞損傷模型,并設(shè)置對(duì)照組（Control）、藥物組（Que）、模型組（APAP）和治療組（A... 

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
研究思路與技術(shù)路線
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 藥物性肝損傷
        1.1 概述
        1.2 APAP的肝毒性
        1.3 APAP肝毒性機(jī)制
        1.4 治療對(duì)策
    2 合歡花
        2.1 合歡花化學(xué)成分
        2.2 合歡花藥理作用研究
        2.3 總結(jié)
    3 槲皮苷
        3.1 抗氧化作用
        3.2 對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用
        3.3 對(duì)心血管系統(tǒng)作用
        3.4 抗炎鎮(zhèn)痛作用
        3.5 抗腫瘤作用
        3.6 抗病毒作用
        3.7 抗糖尿病作用
        3.8 其他作用
        3.9 總結(jié)
    4 本論文研究意義
第二章 合歡花減輕APAP誘導(dǎo)的L-02 細(xì)胞損傷有效物質(zhì)的篩選
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)藥材
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.5 主要試劑的配置
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 合歡花各部位的萃取分離
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 合歡花各部位對(duì)L-02 細(xì)胞活性的影響
        2.4 合歡花減輕APAP誘導(dǎo)的L-02 細(xì)胞損傷有效部位的篩選
        2.5 合歡花有效部位化學(xué)成分分析
        2.6 槲皮苷的分離純化
        2.7 槲皮苷減輕APAP誘導(dǎo)的L-02 細(xì)胞損傷活性篩選
        2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 合歡花各部位的萃取分離
        3.2 合歡花各部位活性篩選
        3.3 合歡花有效部位化學(xué)成分LC-MS分析
        3.4 槲皮苷的鑒定
        3.5 槲皮苷的活性篩選
    4 討論
第三章 槲皮苷減輕APAP誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷藥效學(xué)研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 小鼠分組及給藥
        2.2 取材
        2.3 組織樣本石蠟包埋與切片
        2.4 肝臟組織的H&E染色
        2.5 冰凍切片免疫組化實(shí)驗(yàn)
        2.6 免疫組化實(shí)驗(yàn)
        2.7 小鼠血清中ALT、AST和 LDH水平的測(cè)定
        2.8 小鼠血清中IL-6和TNF-α水平的測(cè)定
        2.9 小鼠肝臟中SOD、GSH、GSH-Px、CAT和 MDA水平的測(cè)定
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 槲皮苷對(duì)小鼠肝臟外觀及肝臟臟器系數(shù)的影響
        3.2 槲皮苷對(duì)小鼠肝臟組織病理學(xué)的影響
        3.3 槲皮苷對(duì)血清中ALT、AST和 LDH水平的影響
        3.4 槲皮苷對(duì)小鼠炎癥水平的影響
        3.5 槲皮苷對(duì)小鼠氧化應(yīng)激水平的影響
    4 討論
第四章 槲皮苷減輕APAP誘導(dǎo)的L-02 細(xì)胞損傷作用機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 主要試劑的配置
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞內(nèi)ROS水平的測(cè)定
        2.3 細(xì)胞線粒體內(nèi)NADH脫氫酶活性的測(cè)定
        2.4 魚藤酮對(duì)槲皮苷藥效影響的測(cè)定
        2.5 蛋白免疫印跡法檢測(cè)L-02 細(xì)胞中NADH脫氫酶的表達(dá)
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 槲皮苷對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響
        3.2 槲皮苷對(duì)細(xì)胞線粒體中NADH脫氫酶活性的影響
        3.3 魚藤酮對(duì)槲皮苷藥效的影響
        3.4 槲皮苷對(duì)NADH脫氫酶表達(dá)的影響
    4 討論
結(jié)語(yǔ)與創(chuàng)新
參考文獻(xiàn)
研究生在讀期間主要研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]合歡花飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)的建立[J]. 馮玉,田宇柔,高樂,范帥帥,李軍山,牛麗穎.  中國(guó)現(xiàn)代中藥. 2019(02)
[3]基于UPLC-Q-Orbitrap MS法分析補(bǔ)肺益腎方的化學(xué)成分[J]. 黃海英,康俊麗,余亞輝,趙鵬,馮素香,杜燕,李建生.  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2019(01)
[4]基于UPLC-LTQ-Orbitrap高分辨質(zhì)譜的中藥瓜蔞化學(xué)成分分析[J]. 李欣,唐力英,許靜,于現(xiàn)闊,楊洪軍,李德鳳,張毅,范建偉,蘇瑞強(qiáng),吳宏偉,張瓊.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2019(01)
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[6]番石榴果實(shí)中黃酮類成分研究[J]. 彭財(cái)英,陳祥云,崔航青,黃應(yīng)正,高映,舒積成.  江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(03)
[7]合歡花水提物對(duì)抑郁模型大鼠認(rèn)知功能及HPA軸的影響[J]. 李旻.  中醫(yī)臨床研究. 2017(04)
[8]合歡花鎮(zhèn)靜催眠作用的譜效關(guān)系研究[J]. 劉家薈,郭偉英.  中藥材. 2016(07)
[9]合歡的不同部位揮發(fā)性成分比較研究[J]. 王麗梅,邱紅漢,周濤.  中國(guó)藥師. 2016(06)
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碩士論文
[1]合歡花黃酮對(duì)MK801誘導(dǎo)的精神分裂癥模型大鼠學(xué)習(xí)能力的影響及其機(jī)制研究[D]. 杜志敏.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 2014



本文編號(hào)：3671176