鐵硫（Fe-S）蛋白在鐵-氧傳感器,酶和基因表達(dá)調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用。NEET蛋白屬于獨(dú)特的鐵硫（Fe-S）蛋白家族,可調(diào)節(jié)鐵和活性氧的體內(nèi)穩(wěn)態(tài),并參與癌癥、糖尿病、神經(jīng)變性和衰老的進(jìn)程。在人類(lèi)線粒體中,NEET蛋白包括:mitoNEET（mNT）,營(yíng)養(yǎng)剝奪自噬1（NAF-1）和線粒體內(nèi)NEET蛋白（Miner2）。mNT是結(jié)合抗2型糖尿病吡格列酮藥物的蛋白,NAF-1蛋白的表達(dá)抑制會(huì)導(dǎo)致壽命縮短,NAF-1和mNT的骨架折疊與植物的同型二聚體NEET蛋白（At-NEET）相似。盡管發(fā)現(xiàn)Miner2蛋白在肺癌,乳腺癌和其他類(lèi)型的癌癥中高表達(dá),但Miner2蛋白在線粒體中的功能了解甚少,所以本文研究Miner2蛋白的相關(guān)性質(zhì)。首先,Miner2蛋白表達(dá)與純化。利用分子生物學(xué)方法,將重組質(zhì)粒pET22b-Miner2（Δ35）轉(zhuǎn)入大腸桿菌（E.coli）BL21中,經(jīng)IPTG（0.3 mM）誘導(dǎo)獲得了該蛋白的可融性表達(dá),經(jīng)Ni-NTA親和層析、CM陽(yáng)離子交換層析多步純化后,得到了比較純的目標(biāo)蛋白。為該蛋白的化學(xué)性質(zhì)研究準(zhǔn)備了必要的材料。其次,Miner2蛋白[2Fe-2S]簇穩(wěn)定性研究... 

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1.1 鐵硫蛋白
        1.1.1 鐵硫蛋白的概述
        1.1.2 鐵硫蛋白的重要性
    1.2 [2Fe-2S]蛋白
        1.2.1 NEET蛋白的定位與分類(lèi)
        1.2.2 NEET蛋白獨(dú)特的結(jié)構(gòu)
    1.3 NEET蛋白家族
        1.3.1 NEET蛋白簡(jiǎn)介
        1.3.2 NEET蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.3.3 NEET蛋白[2Fe-2S]簇結(jié)合域
        1.3.4 NEET蛋白的功能
    1.4 本課題研究意義
第二章 Miner2蛋白的表達(dá)與純化
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 溶液的配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 Miner2 蛋白的表達(dá)
        2.3.2 Miner2 蛋白的純化
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 Miner2 蛋白的表達(dá)
        2.4.2 Miner2 蛋白的純化
        2.4.3 Miner2 蛋白的表征
    2.5 結(jié)論
第三章 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇穩(wěn)定性研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要儀器
    3.3 方法
        3.3.1 紫外-吸收光譜測(cè)定
        3.3.2 熒光光譜測(cè)定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 pH對(duì) Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇穩(wěn)定性的影響
        3.4.2 不同離子強(qiáng)度下Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇動(dòng)力學(xué)研究
        3.4.3 溫度對(duì)Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇動(dòng)力學(xué)研究
        3.4.4 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇在溶液中的存在形式
    3.5 結(jié)論
第四章 Miner2 蛋白氧化還原性研究
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 主要儀器
    4.3 方法
        4.3.1 紫外-吸收光譜測(cè)定
        4.3.2 電化學(xué)方法測(cè)定
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 紫外-吸收光譜研究Miner2 蛋白的氧化還原性
        4.4.2 Miner2 蛋白的循環(huán)伏安研究
    4.5 結(jié)論
第五章 [2Fe-2S]簇對(duì)Miner2 蛋白構(gòu)象的影響
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 主要儀器
    5.3 方法
        5.3.1 熒光光譜測(cè)定
        5.3.2 紫外光譜測(cè)定
        5.3.3 遠(yuǎn)紫外圓二色光譜(CD)測(cè)定
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 [2Fe-2S]簇對(duì)Miner2 蛋白構(gòu)象的影響
        5.4.2 Miner2 蛋白與TNS作用的光譜
        5.4.3 TNS和 Miner2 蛋白Trp60 的能量轉(zhuǎn)移
    5.5 結(jié)論
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]人中心蛋白3與金屬離子結(jié)合的性質(zhì)研究[D]. 楚雪峰.山西大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3654379