目的本研究旨在探討補體C1q/TNF相關(guān)蛋白13（C1q/TNF-related protein 13,CTRP13）對高糖誘導(dǎo)的大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的影響作用及相關(guān)信號途徑。方法培養(yǎng)大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（rat liver sinusoidal endothelial cells,rLSECs）,構(gòu)建慢病毒CTRP13過表達(dá)載體（lentiviral CTRP13 overexpression vector,LV-CTRP13）并轉(zhuǎn)染rLSECs。體外培養(yǎng)rLSECs并用高濃度葡萄糖（25 mM,24 h）處理,分別使用CaMKKβ抑制劑STO-609與AMPK抑制劑Compound C進(jìn)行干預(yù)。MTT比色法用于檢測rLSECs活力。采用RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測CTRP13、CaMKKβ、AMPK、LN和CAV-1的表達(dá)水平。建立糖尿病性脂肪肝大鼠模型,使用HE染色和六胺銀染色觀察模型組大鼠肝臟的組織病理學(xué)特征,用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠肝臟組織的CTRP13表達(dá)。采用SPSS 21.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果高糖作用下,rLSECs內(nèi)CTRP... 

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞對照表
前言
第1章 材料和方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 主要實驗試劑
        1.1.2 主要儀器和設(shè)備
        1.1.3 主要工作液配置
    1.2 實驗方法
        1.2.1 實驗細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.2.2 慢病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
        1.2.3 四甲基偶氮唑藍(lán)(Methylthiazolylterazolium,MTT)比色法檢測大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的活力
        1.2.4 qRT-PCR檢測mRNA的表達(dá)水平
        1.2.5 蛋白免疫印跡方法檢測蛋白表達(dá)水平
        1.2.6 糖尿病性脂肪肝大鼠模型的建立
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
第2章 實驗結(jié)果
    2.1 大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.2 高糖狀態(tài)下rLSECs內(nèi) CTRP13 的表達(dá)明顯降低
    2.3 高糖狀態(tài)下rLSECs內(nèi) LN和 CAV-1 的表達(dá)明顯增加
    2.4 慢病毒CTRP13 過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染增加了rLSECs中 CTRP13 的表達(dá)
    2.5 LV-CTRP13 轉(zhuǎn)染降低了rLSECs中高糖誘導(dǎo)的LN和 CAV-1 的表達(dá)
    2.6 MTT法測定大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的活力
    2.7 LV-CTRP13 轉(zhuǎn)染通過激活A(yù)MPK信號通路抑制了LN和 CAV-1 的表達(dá)
    2.8 LV-CTRP13 轉(zhuǎn)染通過激活CaMKKβ活化轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的AMPK信號通路
    2.9 糖尿病性脂肪肝大鼠肝組織病理學(xué)特征
    2.10 糖尿病性脂肪肝大鼠肝臟基底膜的變化
    2.11 糖尿病性脂肪肝大鼠肝臟中CTRP13 的表達(dá)
第3章 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間主要研究成果



本文編號：3649258