目的:通過研究mi R-130b和PTEN在乳腺癌組織及細(xì)胞株中的差異表達(dá),闡明miR-130b靶向PTEN通過PI3K/Akt信號通路調(diào)控乳腺癌多藥耐藥性及增殖的功能機制,為乳腺癌治療提供新的策略。方法:（1）通過qRT–PCR檢測miR-130b和PTEN在乳腺癌組織（乳腺癌組織和癌旁正常組織）及細(xì)胞株（人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞株MCF-7/ADR）中的差異表達(dá)。（2）特異性上調(diào)MCF-7細(xì)胞中的mi R-130b、下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b,采用real-time PCR、Western Blot、免疫熒光技術(shù)檢測過表達(dá)、干擾前后MCF-7、MCF-7/ADR細(xì)胞中PTEN的表達(dá)情況。（3）采用生物信息學(xué)技術(shù)及雙熒光素酶報告實驗驗證miR-130b與PTEN的靶向關(guān)系。（4）采用CCK8、克隆形成、流式細(xì)胞技術(shù)、免疫熒光、體內(nèi)成瘤及免疫組化技術(shù)驗證miR-130b過表達(dá)及干擾后,乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)、外對藥物敏感性及增殖的變化。（5）特異性上調(diào)MCF-7中miR-130b和PTEN,下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b和PTEN,檢測共轉(zhuǎn)染... 

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1. 實驗材料
        1.1 實驗對象
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2. 實驗方法
        2.1 患者標(biāo)本
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 Real-time PCR
        2.4 免疫印跡分析
        2.5 PTEN和miR-130b的過表達(dá)、干擾
        2.6 雙熒光素酶報告實驗
        2.7 CCK8實驗
        2.8 克隆形成實驗
        2.9 凋亡實驗
        2.10 免疫熒光染色分析
        2.11 體內(nèi)成瘤實驗
        2.12 免疫組化分析
        2.13 統(tǒng)計分析
結(jié)果
    1. miR-130b在人乳腺癌組織及細(xì)胞中的差異表達(dá)
    2. PTEN是miR-130b的直接靶基因，且與miR-130b的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)
    3. 過表達(dá)miR-130b促進MCF-7 細(xì)胞體內(nèi)外耐藥和增殖
    4. 下調(diào)miR-130b誘導(dǎo)MCF-7/ADR細(xì)胞體內(nèi)外藥敏性及抑制增殖
    5. 過表達(dá)miR-130b通過PTEN-PI3K/Akt信號通路促進MCF-7 細(xì)胞耐藥和增殖
    6.下調(diào)miR-130b通過PTEN-PI3K/Akt信號通路抑制MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥和增殖
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Regulation of multidrug resistance by microRNAs in anti-cancer therapy[J]. Xin An,Cesar Sarmiento,Tao Tan,Hua Zhu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2017(01)
[2]Onco-microRNA miR-130b promoting cell growth in children APL by targeting PTEN[J]. Xiang-Cui Gong,Yuan-Qin Xu,Yan Jiang,Hui Guan,Hua-Lin Liu.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(03)



本文編號：3647715