目的:1.構建穩(wěn)定表達的tandem-dimer Tomato（tdTomato）轉基因小鼠并建系,觀察其全身多器官組織的熒光表達情況,檢測其生理生化指標有無異常,確保其符合實驗小鼠的標準;2.提取tdTomato轉基因小鼠的神經干細胞,觀察其在活體細胞移植示蹤實驗中的熒光表達情況。初步嘗試雙色異體干細胞共培養(yǎng)實驗,意在探究離體細胞培養(yǎng)以及分化時熒光表達的穩(wěn)定性。方法:本實驗分為兩個部分。第一部分,使用Gateway clone技術構建tdTomato載體后,將過表達載體通過DNA顯微注射法注入受精卵,然后移植至假孕母鼠體內,待其發(fā)育足月后自然生產。使用雙向鑒定法鑒定并挑取陽性tdTomato轉基因小鼠,置于山西醫(yī)科大學實驗動物中心的屏障環(huán)境中進行飼養(yǎng),交叉配種繁殖并建系。送檢生理生化指標檢測,與正常野生小鼠進行統(tǒng)計學分析。第二部分,提取tdTomato轉基因小鼠的神經干細胞培養(yǎng)至3代,隨后移植到脊髓損傷小鼠模型的脊髓損傷部位進行示蹤觀察。另提取eGFP轉基因小鼠的骨髓間充質干細胞和神經干細胞分別與tdTomato轉基因小鼠的神經干細胞進行雙色異體干細胞共培養(yǎng)實驗,跟蹤拍攝干細胞分化情... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂糖凝膠電泳鑒定篩選陽性載體質粒結果圖

山西醫(yī)科大學碩士學位論文11圖1-2A：tdTomato轉基因新生小鼠陽性與陰性在激發(fā)光下對比結果；B：tdTomato轉基因小鼠與WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激發(fā)光下的對比。提取tdTomato轉基因小鼠的鼠尾DNA，經過凝膠電泳分析表明陽性結果可見在200~400bp之間有雙條帶，陰性結果僅在300~400bp之間有單條帶（圖1-3）。經雙向鑒定結果顯示，在OF-500AC激發(fā)燈頭下呈現(xiàn)陽性結果的tdTomato轉基因小鼠，其鼠尾DNA凝膠電泳鑒定結果亦為陽性。圖1-3：凝膠電泳的鑒定結果的陽性與陰性。

山西醫(yī)科大學碩士學位論文11圖1-2A：tdTomato轉基因新生小鼠陽性與陰性在激發(fā)光下對比結果；B：tdTomato轉基因小鼠與WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激發(fā)光下的對比。提取tdTomato轉基因小鼠的鼠尾DNA，經過凝膠電泳分析表明陽性結果可見在200~400bp之間有雙條帶，陰性結果僅在300~400bp之間有單條帶（圖1-3）。經雙向鑒定結果顯示，在OF-500AC激發(fā)燈頭下呈現(xiàn)陽性結果的tdTomato轉基因小鼠，其鼠尾DNA凝膠電泳鑒定結果亦為陽性。圖1-3：凝膠電泳的鑒定結果的陽性與陰性。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3614857