目的:1.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)的tandem-dimer Tomato（tdTomato）轉(zhuǎn)基因小鼠并建系,觀察其全身多器官組織的熒光表達(dá)情況,檢測其生理生化指標(biāo)有無異常,確保其符合實(shí)驗(yàn)小鼠的標(biāo)準(zhǔn);2.提取tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠的神經(jīng)干細(xì)胞,觀察其在活體細(xì)胞移植示蹤實(shí)驗(yàn)中的熒光表達(dá)情況。初步嘗試雙色異體干細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),意在探究離體細(xì)胞培養(yǎng)以及分化時(shí)熒光表達(dá)的穩(wěn)定性。方法:本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分。第一部分,使用Gateway clone技術(shù)構(gòu)建tdTomato載體后,將過表達(dá)載體通過DNA顯微注射法注入受精卵,然后移植至假孕母鼠體內(nèi),待其發(fā)育足月后自然生產(chǎn)。使用雙向鑒定法鑒定并挑取陽性tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠,置于山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的屏障環(huán)境中進(jìn)行飼養(yǎng),交叉配種繁殖并建系。送檢生理生化指標(biāo)檢測,與正常野生小鼠進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。第二部分,提取tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)至3代,隨后移植到脊髓損傷小鼠模型的脊髓損傷部位進(jìn)行示蹤觀察。另提取eGFP轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞分別與tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行雙色異體干細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),跟蹤拍攝干細(xì)胞分化情... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂糖凝膠電泳鑒定篩選陽性載體質(zhì)粒結(jié)果圖

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖1-2A：tdTomato轉(zhuǎn)基因新生小鼠陽性與陰性在激發(fā)光下對(duì)比結(jié)果；B：tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠與WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激發(fā)光下的對(duì)比。提取tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠的鼠尾DNA，經(jīng)過凝膠電泳分析表明陽性結(jié)果可見在200~400bp之間有雙條帶，陰性結(jié)果僅在300~400bp之間有單條帶（圖1-3）。經(jīng)雙向鑒定結(jié)果顯示，在OF-500AC激發(fā)燈頭下呈現(xiàn)陽性結(jié)果的tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠，其鼠尾DNA凝膠電泳鑒定結(jié)果亦為陽性。圖1-3：凝膠電泳的鑒定結(jié)果的陽性與陰性。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖1-2A：tdTomato轉(zhuǎn)基因新生小鼠陽性與陰性在激發(fā)光下對(duì)比結(jié)果；B：tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠與WT小鼠的鼠尾在正常光源下和激發(fā)光下的對(duì)比。提取tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠的鼠尾DNA，經(jīng)過凝膠電泳分析表明陽性結(jié)果可見在200~400bp之間有雙條帶，陰性結(jié)果僅在300~400bp之間有單條帶（圖1-3）。經(jīng)雙向鑒定結(jié)果顯示，在OF-500AC激發(fā)燈頭下呈現(xiàn)陽性結(jié)果的tdTomato轉(zhuǎn)基因小鼠，其鼠尾DNA凝膠電泳鑒定結(jié)果亦為陽性。圖1-3：凝膠電泳的鑒定結(jié)果的陽性與陰性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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