目的:探討超順磁性Fe₃O₄納米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）介導的磷脂酰肌醇3激酶γ（phosphatidylinositol3 kinaseγ,PI3Kγ）抑制表達調(diào)控的腫瘤相關(guān)巨噬細胞（tumor-associated macrophages,TAMs）對小鼠Lewis肺癌細胞（lewis lung carcinoma,LLC）增殖和凋亡的影響。方法:1.構(gòu)建3條能啟動巨噬細胞（Macrophages,MФ）特異性表達PI3Kγ催化亞基p100（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit gamma,PIK3CG）siRNA的pSilencer-EGFP-SP-p110質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染小鼠RAW264.7細胞,通過熒光顯微鏡觀察各組細胞熒光蛋白的表達情況,通過Real-time PCR和Western blot檢測細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后表達siRNA的能力及其對PI3Kγp110基因沉默的效... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pSilencer-EGFP-SP-p110重組質(zhì)粒構(gòu)建示意圖

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文28圖1-2pSilencer-EGFP-SP-p110重組質(zhì)粒的單酶切鑒定Fig.1-2IdentificationofpSilencer-EGFP-SP-p110recombinantplasmidbyrestrictionenzymedigestion2.1.2測序鑒定利用pSilencer4.1-CMVneo載體的通用測序引物分別對三條重組質(zhì)粒S1、S2、S3中的發(fā)夾結(jié)構(gòu)PI3Kγp100siRNA的模板DNA進行序列分析。測序報告如下：（1）pS-EGFP-SP-p110-1（S1）AAGCTTGAATTCCAGAAAGTCAAAGTGAGCAGGATTTTCTCTTGAAAAATCCTGCTCACTTTGACTTTCTGGGATCC（2）pS-EGFP-SP-p110-2（S2）AAGCTTGAATTCAGTATGACGTCAGTTCCCAAGTTATTCTCTTGAAATAACTTGGGAACTGACGTCATACTGGATCC（3）pS-EGFP-SP-p110-2（S3）AAGCTTGAATTCCAGAGACAGGAAACCTATTTCATATTCTCTTGAAATATGAAATAGGTTTCCTGTCTCTGGGATCC測序結(jié)果表明：三條重組質(zhì)粒S1、S2、S3中插入的針對PI3Kγp100siRNA的模板序列均與前期設(shè)計的寡核苷酸鏈序列完全一致，表明三條重組質(zhì)粒均構(gòu)建成功。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文292.2RAW264.7細胞轉(zhuǎn)染S1、S2、S3重組質(zhì)粒后的熒光蛋白表達情況三條重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞24h后，通過倒置熒光顯微鏡觀察到重組質(zhì)粒S1、S2、S3轉(zhuǎn)染的細胞均可表達綠色熒光蛋白（圖1-3），且重組質(zhì)粒S1轉(zhuǎn)染的細胞熒光密度相對于重組質(zhì)粒S2和S3轉(zhuǎn)染的細胞高。圖1-3熒光顯微鏡觀察RAW264.7細胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后熒光的表達Fig.1-3FluorescenceexpressionofRAW264.7cellstransfectedwithrecombinantplasmidwasobservedbyfluorescencemicroscopeA:重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞24h后（熒光顯微鏡,100×）；B:重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞24h后（相差顯微鏡,100×）A:theplasmidtransfectedcellsunderfluorescencemicroscope(100×);B:theplasmidtransfectedcellsunderordinaryopticalmicroscopy(100×)2.3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的RAW264.7細胞PI3Kγp110mRNA的轉(zhuǎn)錄水平Real-timePCR結(jié)果顯示（圖1-4），重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞24h后，五組細胞PI3Kγp110mRNA的相對轉(zhuǎn)錄水平為：S1轉(zhuǎn)染組（0.35±0.21）＜S3轉(zhuǎn)染組（0.36±0.21）＜S2轉(zhuǎn)染組（0.43±0.16）＜空質(zhì)粒對照組（0.71±0.26）＜空白對照組（定為1），通過組間比較，三條重組質(zhì)粒S1、S2、S3轉(zhuǎn)染組與空質(zhì)粒對照組

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]磁性四氧化三鐵納米微球的制備及在藥物輸送中的應用研究[D]. 許光宇.河南大學 2015
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本文編號：3594000