目的:本研究旨在通過構(gòu)建體外BV-2細(xì)胞炎癥模型,探討miR-199a-5p對(duì)SIRT1的生物學(xué)調(diào)控功能,初步闡釋在體外BV-2細(xì)胞炎癥模型中miR-199a-5p調(diào)節(jié)炎性損傷的分子機(jī)制,為腦出血后繼發(fā)性炎性損傷的干預(yù)治療提供新的理論依據(jù)。方法:1.體外BV-2細(xì)胞炎癥模型建立及驗(yàn)證、檢測(cè)模型中miR-199a-5p及SIRT1的表達(dá)情況、SIRT1的亞細(xì)胞定位:利用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的活力,qRT-PCR法、ELISA法及Western Blot法測(cè)定miR-199a-5p、SIRT1及促炎因子（IL-1β、IL-6）的相對(duì)表達(dá)量,免疫熒光染色顯示SIRT1在BV-2細(xì)胞中亞細(xì)胞定位。2.驗(yàn)證miR-199a-5p與SIRT1的結(jié)合位點(diǎn)及調(diào)控關(guān)系:使用TargetScan、miRTarBase等生物信息軟件預(yù)測(cè)miR-199a-5p與SIRT1的結(jié)合位點(diǎn),并利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證;使用生物合成的miR-199a-5p mimic/inhibitor及陰性對(duì)照分別處理BV-2細(xì)胞,qRT-PCR法、Western Blot法測(cè)定miR-199a-5p、SIRT1的相對(duì)表達(dá)量... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LPS刺激對(duì)BV-2細(xì)胞形態(tài)的影響

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高揚(yáng)33圖2BV-2細(xì)胞炎性損傷程度與LPS的作用時(shí)間及作用濃度的關(guān)系。無LPS處理作為對(duì)照組（Control組）。予LPS（50ug/ml）刺激BV-2細(xì)胞作用不同時(shí)間點(diǎn)，A通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力（n=3）；B、C通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)促炎因子IL-1β、IL6的相對(duì)表達(dá)量（n=3）。予不同濃度LPS刺激BV-2細(xì)胞48h，D通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力（n=3）。予LPS（100ug/ml）刺激BV-2細(xì)胞48h，E通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)促炎因子IL-1β、IL6的相對(duì)表達(dá)量（n=3），F(xiàn)、G通過ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液促炎因子IL-1β、IL6的濃度（n=3）。ns無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高揚(yáng)343.2BV-2細(xì)胞炎癥模型中miR-199a-5p的表達(dá)增加通過建立體外BV-2細(xì)胞炎癥模型，并測(cè)定模型中miR-199a-5p的相對(duì)表達(dá)量。如圖3A所示，LPS組miR-199a-5p的相對(duì)表達(dá)明顯高于Control組（**P＜0.01）。3.3在BV-2細(xì)胞中，miR-199a-5pmimic能明顯增加miR-199a-5p的表達(dá)量，miR-199a-5pinhibitor能明顯抑制miR-199a-5p的表達(dá)量BV-2細(xì)胞炎癥模型中，miR-199a-5p的相對(duì)表達(dá)量明顯增加，可能預(yù)示著miR-199a-5p在LPS誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞炎性損傷過程中發(fā)揮重要作用。因此，通過利用miR-199a-5pmimic/inhibitor及陰性對(duì)照分別轉(zhuǎn)染BV-2細(xì)胞，測(cè)定miR-199a-5p在BV-2細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量。如圖3B所示，miR-199a-5p在miR-199a-5pmimic組的相對(duì)表達(dá)明顯高于mimicNC組（****P＜0.0001）；miR-199a-5p在miR-199a-5pinhibitor組的相對(duì)表達(dá)明顯低于inhibitorNC組（**P＜0.01）。圖3miR-199a-5p在BV-2細(xì)胞炎癥模型中的表達(dá)情況及miR-199a-5pmimic/inhibitor轉(zhuǎn)染BV-2細(xì)胞后miR-199a-5p的表達(dá)情況。無LPS處理作為對(duì)照組（Control組），通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-199a-5p的相對(duì)表達(dá)量（n=3）。AmiR-199a-5p在Control組與LPS組的相對(duì)表達(dá)量。B轉(zhuǎn)染BV-2細(xì)胞后miR-199a-5p在各組中的相對(duì)表達(dá)量。**P＜0.01，****P＜0.0001。


本文編號(hào)：3559352