第一部分阿拉伯半乳聚糖適配子的篩選及診斷價(jià)值評(píng)估背景與目的:結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的慢性傳染性疾病。MTB特有的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)是由分枝菌酸、肽聚糖和阿拉伯半乳聚糖（arabinogalactan,AG）通過共價(jià)連接組成,對(duì)菌的生存和復(fù)制極其重要。AG連接細(xì)胞壁外層的分枝菌酸和內(nèi)層的肽聚糖對(duì)維持細(xì)胞壁的完整性非常重要,且為分枝桿菌所特有。糖類抗體制備難度較大,目前尚無靶向AG的抗體,而通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）技術(shù)篩選獲得的適配子能與蛋白、病毒、細(xì)胞等不同靶標(biāo)高親和力結(jié)合。因此,本研究目的是通過SELEX技術(shù)篩選分枝桿菌AG的適配子,并初步應(yīng)用于MTB的檢測(cè)。方法體外構(gòu)建合成一個(gè)含78個(gè)堿基的隨機(jī)ssDNA文庫,通過SELEX技術(shù)從隨機(jī)ssDNA文庫中篩選獲得分枝桿菌AG的適配子庫,將適配子庫進(jìn)行克隆、測(cè)序。通過DNAMAN軟件分析適配子的結(jié)構(gòu),MEGA軟件分析適配子的系統(tǒng)進(jìn)化樹,酶聯(lián)寡核苷酸吸... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂糖凝膠電泳分析第1輪和第7輪篩選獲得的ssDNA文庫

第2章AG適配子的篩選及診斷價(jià)值評(píng)估11（30/33）的適配子為一個(gè)優(yōu)勢(shì)群，9.1%（3/33）的適配子表現(xiàn)出較大差異（圖2.2A）。經(jīng)過7輪篩選，與靶標(biāo)結(jié)合的適配子確實(shí)得到很好的富集。適配子命名根據(jù)篩選過程編號(hào)（例如，適配子MAA1是篩選過程中第一個(gè)分枝桿菌AG的適配子）。所有的適配子均包含保守核酸序列，通過分析這些不同核心序列的適配子的序列演化發(fā)現(xiàn)各適配子的核心序列中有28個(gè)堿基的同源水平大于75%（圖2.2B）。圖2.2AG適配子的系統(tǒng)演變（A）適配子的系統(tǒng)進(jìn)化樹；（B）具有不同核心序列的適配子序列演化圖。2.2.3AG適配子的親和力和二級(jí)結(jié)構(gòu)獲得的33個(gè)適配子共有20種不同核心序列，將這20個(gè)不同核心序列的適配子進(jìn)行與AG親和力的鑒定。不同序列的適配子有著不一樣的空間結(jié)構(gòu)與AG結(jié)合能力不一，親和力也不一，其中適配子MAA2顯示和AG的親和力最高，而MAA20最低。5個(gè)適配子（MAA2，MAA5，MAA8，MAA27，MAA28）與AG的親和力大于1.0視為高親和力適配子。在優(yōu)勢(shì)群適配子中，6個(gè)適配子序列和MAA5序列一樣，為優(yōu)勢(shì)適配子，其中親和力以MAA5最高。MAA5的核心結(jié)構(gòu)如圖2.3。33個(gè)適配子共有11種二級(jí)結(jié)構(gòu)，其中8種均有莖環(huán)和口袋結(jié)構(gòu)，這提示莖環(huán)和口袋結(jié)構(gòu)可能是適配子和AG結(jié)合的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)（圖2.4）。

適配子MAA5的核心序列二級(jí)結(jié)構(gòu)圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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