第一部分阿拉伯半乳聚糖適配子的篩選及診斷價值評估背景與目的:結核病是由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的慢性傳染性疾病。MTB特有的細胞壁結構是由分枝菌酸、肽聚糖和阿拉伯半乳聚糖（arabinogalactan,AG）通過共價連接組成,對菌的生存和復制極其重要。AG連接細胞壁外層的分枝菌酸和內(nèi)層的肽聚糖對維持細胞壁的完整性非常重要,且為分枝桿菌所特有。糖類抗體制備難度較大,目前尚無靶向AG的抗體,而通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）技術篩選獲得的適配子能與蛋白、病毒、細胞等不同靶標高親和力結合。因此,本研究目的是通過SELEX技術篩選分枝桿菌AG的適配子,并初步應用于MTB的檢測。方法體外構建合成一個含78個堿基的隨機ssDNA文庫,通過SELEX技術從隨機ssDNA文庫中篩選獲得分枝桿菌AG的適配子庫,將適配子庫進行克隆、測序。通過DNAMAN軟件分析適配子的結構,MEGA軟件分析適配子的系統(tǒng)進化樹,酶聯(lián)寡核苷酸吸... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂糖凝膠電泳分析第1輪和第7輪篩選獲得的ssDNA文庫

第2章AG適配子的篩選及診斷價值評估11（30/33）的適配子為一個優(yōu)勢群，9.1%（3/33）的適配子表現(xiàn)出較大差異（圖2.2A）。經(jīng)過7輪篩選，與靶標結合的適配子確實得到很好的富集。適配子命名根據(jù)篩選過程編號（例如，適配子MAA1是篩選過程中第一個分枝桿菌AG的適配子）。所有的適配子均包含保守核酸序列，通過分析這些不同核心序列的適配子的序列演化發(fā)現(xiàn)各適配子的核心序列中有28個堿基的同源水平大于75%（圖2.2B）。圖2.2AG適配子的系統(tǒng)演變（A）適配子的系統(tǒng)進化樹；（B）具有不同核心序列的適配子序列演化圖。2.2.3AG適配子的親和力和二級結構獲得的33個適配子共有20種不同核心序列，將這20個不同核心序列的適配子進行與AG親和力的鑒定。不同序列的適配子有著不一樣的空間結構與AG結合能力不一，親和力也不一，其中適配子MAA2顯示和AG的親和力最高，而MAA20最低。5個適配子（MAA2，MAA5，MAA8，MAA27，MAA28）與AG的親和力大于1.0視為高親和力適配子。在優(yōu)勢群適配子中，6個適配子序列和MAA5序列一樣，為優(yōu)勢適配子，其中親和力以MAA5最高。MAA5的核心結構如圖2.3。33個適配子共有11種二級結構，其中8種均有莖環(huán)和口袋結構，這提示莖環(huán)和口袋結構可能是適配子和AG結合的結構基礎（圖2.4）。

適配子MAA5的核心序列二級結構圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]結核分枝桿菌相關檢測試劑盒對結核分枝桿菌感染的診斷價值研究[J]. 曾海清,熊君暉,溫順華,林海軍,孫旭東.  國際檢驗醫(yī)學雜志. 2019(12)
[2]結核病分子診斷研究進展[J]. 梅珍珍.  湖北科技學院學報(醫(yī)學版). 2017(01)
[3]320排螺旋CT雙入口灌注技術在肺結核的臨床應用[J]. 李利佳,敖國昆,袁小東,李明星,許國宇,喬遠罡,秦崇,韓東梅.  放射學實踐. 2014(03)
[4]肺結核門診診療規(guī)范（2012年版）[J].   中國醫(yī)學前沿雜志(電子版). 2013(03)
[5]現(xiàn)場條件下痰涂片查抗酸桿菌石炭酸復紅染色方法的差異[J]. A．Van Deun,A．Hamid Salim,K．J．M．Aung,Md．A．Hossain,N．Chambugonj,Md．A．Hye,A．Kawria,E．Declercq,張宗德.  國際結核病與肺部疾病雜志(中文版). 2006(Z1)
[6]CT在肺結核療效判斷與隨訪觀察中的應用評價[J]. 宋其生,路希偉,王鎮(zhèn)山,張國慶.  國際呼吸雜志. 2008 (24)



本文編號：3545883