目的:代謝相關(guān)脂肪性肝病（MAFLD）,既往又稱非酒精性脂肪性肝�。∟AFLD）,是代謝綜合征的肝臟表型,是以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)沉積為主要特征的一種慢性代謝性疾病。世界范圍內(nèi)NAFLD的人群患病率約為25.24%,最新流行病學(xué)結(jié)果顯示:2019年我國NAFLD患病率約29.8%。NAFLD的臨床病理學(xué)范圍包括非酒精性脂肪肝（NAFL）或單純性脂肪肝,非酒精性脂肪性肝炎（NASH）,肝纖維化和肝硬化。棕櫚酸（PA）誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡在NAFLD的進(jìn)展中至關(guān)重要。1,4,5-三磷酸肌醇1型受體（IP3R1）是細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺釋放通道,參與PA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡。盡管NAFLD患者和PA處理的肝細(xì)胞中IP3R1蛋白的表達(dá)都表現(xiàn)為明顯升高,但目前尚不清楚PA如何促進(jìn)IP3R1的表達(dá)。因此,本研究擬探索PA處理肝細(xì)胞后IP3R1蛋白表達(dá)增加的原因,并初步探討其分子機(jī)制。方法:第一部分:不同濃度PA處理肝細(xì)胞,進(jìn)行檢測(cè)線粒體膜電位、凋亡蛋白cleaved-caspase3和細(xì)胞凋亡,以確定誘導(dǎo)肝細(xì)胞線粒體功能障礙和細(xì)胞凋亡的最適PA濃度,并用MitoSOX染色檢測(cè)了該最適PA濃度... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

棕櫚酸對(duì)線粒體超氧化物聚積的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1.1，P<0.001）。圖1.1棕櫚酸對(duì)線粒體膜電位的影響Figure1.1EffectofPAonmitochondrialmembranepotential酶標(biāo)儀檢測(cè)JC-1的熒光強(qiáng)度；n=3，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤，***P<0.001與0PA處理組比較。Mitochondrialmembranepotentialat24hwasassessedbyJC-1fluorescenceinL02cells;n=3,Mean±SEM,***P＜0.001vs0PA-treatmentgroupMitoSOX染色用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧化物聚積，結(jié)果顯示，與ctrl組相比，PA組MitoSOX染色紅色熒光明顯增強(qiáng)，提示PA增強(qiáng)L02細(xì)胞內(nèi)的超氧化物聚積，出現(xiàn)線粒體功能損傷（圖1.2，P<0.001）。圖1.2棕櫚酸對(duì)線粒體超氧化物聚積的影響Figure1.2EffectofPAonmitochondrialsuperoxideaccumulationa)激光共聚焦顯微鏡觀察MitoSox染色；b)MitoSOX染色靶圖；n=3，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤，***P<0.001與Ctrl組比較a)MitochondrialsuperoxidewasdetectedbyMitoSOXstaining;b)Meanfluorescenceintensity(MFI)ofMitoSOX;n=3,Mean±SEM,***P＜0.001vsCtrlgroup

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文222.2棕櫚酸處理導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡Cleaved-caspase-3是重要的凋亡分子,cleaved-caspase-3表達(dá)的增加常常提示細(xì)胞凋亡的發(fā)生。Westernblot結(jié)果顯示，無論在L02細(xì)胞上，還是在HepG2細(xì)胞上，cleaved-caspase-3的表達(dá)均隨著PA處理濃度的增加而增加，提示肝細(xì)胞的凋亡具有PA濃度依賴性（圖1.3，P<0.05）。圖1.3棕櫚酸對(duì)凋亡蛋白的影響Figure1.3EffectofPAonapoptosisproteina）Western-blot檢測(cè)cleaved-caspase-3；b）cleaved-caspase-3/actin的靶圖；n=3，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤，**P<0.01與0mMPA組比較a)Cleaved-caspase3-proteinassociatedwithapoptosiswasdetectedbywesternblotinbothinL02andHepG2cells;b)Targetmapofcleaved-caspase-3/actin;n=3,Mean±SEM,**P＜0.01vs0mMPAgroupAnnexin/PI對(duì)不同濃度PA處理的L02細(xì)胞進(jìn)行染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示，在對(duì)照細(xì)胞（0mMPA）和以0.2mMPA、0.4mMPA和0.8mMPA處理的細(xì)胞中，早期凋亡細(xì)胞分別占2.4％，5.36％，14.2％和29.2％，提示用PA處理的L02細(xì)胞以劑量依賴性方式表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡（圖1.4，P<0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Apoptosis and non-alcoholic fatty liver diseases[J]. Tatsuo Kanda,Shunichi Matsuoka,Motomi Yamazaki,Toshikatsu Shibata,Kazushige Nirei,Hiroshi Takahashi,Tomohiro Kaneko,Mariko Fujisawa,Teruhisa Higuchi,Hitomi Nakamura,Naoki Matsumoto,Hiroaki Yamagami,Masahiro Ogawa,Hiroo Imazu,Kazumichi Kuroda,Mitsuhiko Moriyama.  World Journal of Gastroenterology. 2018(25)
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