發(fā)布時間：2021-11-25 04:48

　　目的:基于視網(wǎng)膜新生血管生成相關(guān)的mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路,探討右歸丸治療增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用靶點(diǎn)和分子機(jī)制,為中醫(yī)藥防治糖尿病視網(wǎng)膜病變提供新的思路與科學(xué)依據(jù)。方法:選擇大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞,通過在培養(yǎng)基中同時加入33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl₂,將內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)96h,建立體外高糖缺氧細(xì)胞模型,模擬PDR過度增殖的病理狀態(tài)。將內(nèi)皮細(xì)胞按不同培養(yǎng)條件分為正常組、模型組、右歸丸藥物血清高、中、低劑量組。采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法和細(xì)胞劃痕法分別觀察右歸丸藥物血清對模型細(xì)胞增殖和遷移的影響;采用RT-PCR法檢測各組細(xì)胞mTORmRNA、4EBP1mRNA、HIF-1αmRNA、VEGFmRNA基因表達(dá)水平;Western blot法檢測各組細(xì)胞p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.在大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中加入33mmol/L的葡萄糖和100umol/L的CoCl₂培養(yǎng)96h,可成功模擬出PDR內(nèi)皮細(xì)胞過度增殖的病理狀態(tài)。2.MTT檢測細(xì)胞增殖... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

右歸丸藥物血清對大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響

右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究32表5右歸丸藥物血清對高糖缺氧模型大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響（xs）相對表達(dá)量分組Np-mTORp-4EBP1HIF-1αVEGF正常組31±0.05541±0.05331±0.08661±0.1298模型組31.6536±0.0863▲1.4977±0.115▲1.7709±0.1012▲1.6389±0.1227▲高劑量組31.1335±0.0648●1.1404±0.0891●1.0225±0.0847●1.1288±0.0961●中劑量組31.3253±0.1009▲●1.3055±0.0972▲1.2052±0.0880●1.3639±0.1079▲低劑量組31.4604±0.0751▲◆1.3436±0.0984▲1.4717±0.0924▲●◆1.4617±0.1176▲注：組間兩兩比較時調(diào)整檢驗(yàn)水準(zhǔn)為a′=0.05/比較次數(shù)=0.005，，與正常組比較▲P≤0.005，與模型組比較●P≤0.005，與高劑量組比較◆P≤0.005�？瞻捉M模型組圖7各組細(xì)胞蛋白表達(dá)條帶圖高劑量組GAPDHp-mTORp-4EBP1HIF-αVEGF37KD26KD26KD90KD26KD中劑量組低劑量組

右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究40圖13mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路示意圖4.2.3.2HIF-1α與PDR持續(xù)的氧氣供應(yīng)對于所有真核生物的正常組織發(fā)育、動態(tài)平衡和功能是必不可少的。氧是調(diào)節(jié)膜運(yùn)輸、細(xì)胞內(nèi)信號傳遞、許多基因表達(dá)和細(xì)胞存活的主要元素[65]。當(dāng)組織氧合需求超過血管供應(yīng)時，就會發(fā)生缺氧。對低氧水平的反應(yīng)是由HIF-1介導(dǎo)的。HIF-1是由氧依賴性亞基（HIF-1α）和組成性表達(dá)核亞基（HIF-1β）組成的異二聚體復(fù)合物[66]，在人類中機(jī)體內(nèi)，HIF1a、EPAS1和HIF3A基因分別編碼三種不同的HIF-α亞型(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)[67]。缺氧誘導(dǎo)因子-1α在所有組織中普遍表達(dá)，HIF-2α主要在肺、內(nèi)皮和頸動脈表達(dá)；HIF-3α主要在成人胸腺、肺、腦、心臟和腎臟中表達(dá)[68]。新生血管生成是一個涉及多種基因蛋白的復(fù)雜過程。缺氧是血管生成開關(guān)重要的誘導(dǎo)因子，HIF-1α可通過直接轉(zhuǎn)錄上調(diào)VEGF，在生成新生血管中起主導(dǎo)作用。視網(wǎng)膜是一種光敏組織，也是人體代謝最活躍的組織之一。眼球的氧氣供應(yīng)是通過脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜血管循環(huán)來調(diào)節(jié)的，這兩種血管在調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜生理方面都起著重要作用。研究表明敲除小鼠HIF-1α基因的DM小鼠模型中，VEGF和細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）的產(chǎn)生減少。與野生型小鼠相比，敲除HIF-1α基因小鼠的血管滲漏和新生血管明顯減少[69]。張瑞萍等用小分子RNA干擾DR小鼠HIF-1α，發(fā)現(xiàn)特異性沉默HIF-1α基因可減少VEGF表達(dá)抑制血管新生[70]。這些研究均表明改變HIF-1α通路可能是延緩NPDR向PDR

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]N-乙酰半胱氨酸通過AMPK/SIRT1途徑抑制缺氧誘導(dǎo)的大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[J]. 張?zhí)N,韓新生,張洪陽,徐建可.  中國動脈硬化雜志. 2020(02)
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[9]附子理中湯對脾陽虛大鼠脂質(zhì)過氧化損傷和能量代謝障礙的影響[J]. 翟美麗,于漫,劉俊蘭,王彩霞.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2017(11)
[10]糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)展的相關(guān)危險因素及防治策略[J]. 吳立巖.  中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)

碩士論文
[1]右歸丸藥物血清對體外高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF/PI3K/Akt信號通路的影響[D]. 楊敏.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]基于“陰中求陽”立法之右歸丸對糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠VEGF-VEGFR促存活信號通路的調(diào)控作用研究[D]. 李歡.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[3]紅景天苷對體外高糖缺氧環(huán)境下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞Flk-1/Akt/eNOS信號通路等影響的研究[D]. 翟仰魁.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013
[4]黃芪提取物對體外高糖培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 吳春曉.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2007



本文編號：3517432