右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究
發(fā)布時間:2021-11-25 04:48
目的:基于視網(wǎng)膜新生血管生成相關(guān)的mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路,探討右歸丸治療增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用靶點(diǎn)和分子機(jī)制,為中醫(yī)藥防治糖尿病視網(wǎng)膜病變提供新的思路與科學(xué)依據(jù)。方法:選擇大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞,通過在培養(yǎng)基中同時加入33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2,將內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)96h,建立體外高糖缺氧細(xì)胞模型,模擬PDR過度增殖的病理狀態(tài)。將內(nèi)皮細(xì)胞按不同培養(yǎng)條件分為正常組、模型組、右歸丸藥物血清高、中、低劑量組。采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法和細(xì)胞劃痕法分別觀察右歸丸藥物血清對模型細(xì)胞增殖和遷移的影響;采用RT-PCR法檢測各組細(xì)胞mTORmRNA、4EBP1mRNA、HIF-1αmRNA、VEGFmRNA基因表達(dá)水平;Western blot法檢測各組細(xì)胞p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.在大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中加入33mmol/L的葡萄糖和100umol/L的CoCl2培養(yǎng)96h,可成功模擬出PDR內(nèi)皮細(xì)胞過度增殖的病理狀態(tài)。2.MTT檢測細(xì)胞增殖...
【文章來源】:甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省
【文章頁數(shù)】:62 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
右歸丸藥物血清對大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響
右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究32表5右歸丸藥物血清對高糖缺氧模型大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(xs)相對表達(dá)量分組Np-mTORp-4EBP1HIF-1αVEGF正常組31±0.05541±0.05331±0.08661±0.1298模型組31.6536±0.0863▲1.4977±0.115▲1.7709±0.1012▲1.6389±0.1227▲高劑量組31.1335±0.0648●1.1404±0.0891●1.0225±0.0847●1.1288±0.0961●中劑量組31.3253±0.1009▲●1.3055±0.0972▲1.2052±0.0880●1.3639±0.1079▲低劑量組31.4604±0.0751▲◆1.3436±0.0984▲1.4717±0.0924▲●◆1.4617±0.1176▲注:組間兩兩比較時調(diào)整檢驗(yàn)水準(zhǔn)為a′=0.05/比較次數(shù)=0.005,,與正常組比較▲P≤0.005,與模型組比較●P≤0.005,與高劑量組比較◆P≤0.005?瞻捉M模型組圖7各組細(xì)胞蛋白表達(dá)條帶圖高劑量組GAPDHp-mTORp-4EBP1HIF-αVEGF37KD26KD26KD90KD26KD中劑量組低劑量組
右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究40圖13mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路示意圖4.2.3.2HIF-1α與PDR持續(xù)的氧氣供應(yīng)對于所有真核生物的正常組織發(fā)育、動態(tài)平衡和功能是必不可少的。氧是調(diào)節(jié)膜運(yùn)輸、細(xì)胞內(nèi)信號傳遞、許多基因表達(dá)和細(xì)胞存活的主要元素[65]。當(dāng)組織氧合需求超過血管供應(yīng)時,就會發(fā)生缺氧。對低氧水平的反應(yīng)是由HIF-1介導(dǎo)的。HIF-1是由氧依賴性亞基(HIF-1α)和組成性表達(dá)核亞基(HIF-1β)組成的異二聚體復(fù)合物[66],在人類中機(jī)體內(nèi),HIF1a、EPAS1和HIF3A基因分別編碼三種不同的HIF-α亞型(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)[67]。缺氧誘導(dǎo)因子-1α在所有組織中普遍表達(dá),HIF-2α主要在肺、內(nèi)皮和頸動脈表達(dá);HIF-3α主要在成人胸腺、肺、腦、心臟和腎臟中表達(dá)[68]。新生血管生成是一個涉及多種基因蛋白的復(fù)雜過程。缺氧是血管生成開關(guān)重要的誘導(dǎo)因子,HIF-1α可通過直接轉(zhuǎn)錄上調(diào)VEGF,在生成新生血管中起主導(dǎo)作用。視網(wǎng)膜是一種光敏組織,也是人體代謝最活躍的組織之一。眼球的氧氣供應(yīng)是通過脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜血管循環(huán)來調(diào)節(jié)的,這兩種血管在調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜生理方面都起著重要作用。研究表明敲除小鼠HIF-1α基因的DM小鼠模型中,VEGF和細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)的產(chǎn)生減少。與野生型小鼠相比,敲除HIF-1α基因小鼠的血管滲漏和新生血管明顯減少[69]。張瑞萍等用小分子RNA干擾DR小鼠HIF-1α,發(fā)現(xiàn)特異性沉默HIF-1α基因可減少VEGF表達(dá)抑制血管新生[70]。這些研究均表明改變HIF-1α通路可能是延緩NPDR向PDR
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]N-乙酰半胱氨酸通過AMPK/SIRT1途徑抑制缺氧誘導(dǎo)的大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[J]. 張?zhí)N,韓新生,張洪陽,徐建可. 中國動脈硬化雜志. 2020(02)
[2]小分子RNA干擾HIF-1α對糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用及機(jī)制[J]. 張瑞萍,劉紅凌. 國際眼科雜志. 2019(12)
[3]不同方法構(gòu)建的心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型[J]. 寧小偉,蘇和,張瑞芬. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(93)
[4]基于“少火生氣,壯火食氣”理論論治兒童難治性腎病綜合征[J]. 王雪峰,張秀英,王美嬌. 中醫(yī)雜志. 2019(16)
[5]基于“陰中求陽”理論探討右歸丸及其拆方對腎陽虛證大鼠睪丸組織的影響[J]. 王孫亞,李望輝,韓忠,周興,賓東華,孫貴香,何清湖. 中華中醫(yī)藥雜志. 2018(10)
[6]結(jié)合血清代謝組學(xué)與支持向量回歸機(jī)揭示右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛證的代謝標(biāo)志物群及其作用機(jī)制[J]. 陳瑞群,廖成彬,郭茜,張磊,王秀鳳. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2018(13)
[7]2型糖尿病患者中醫(yī)證候特征與視網(wǎng)膜病變進(jìn)展相關(guān)性臨床研究[J]. 王養(yǎng)忠,柳紅芳,姜旻,許家駿. 中華中醫(yī)藥雜志. 2018(03)
[8]糖基化終產(chǎn)物對糖尿病微血管病變的影響及中醫(yī)藥研究[J]. 胡秀,方朝暉. 山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2018(01)
[9]附子理中湯對脾陽虛大鼠脂質(zhì)過氧化損傷和能量代謝障礙的影響[J]. 翟美麗,于漫,劉俊蘭,王彩霞. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2017(11)
[10]糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)展的相關(guān)危險因素及防治策略[J]. 吳立巖. 中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)
碩士論文
[1]右歸丸藥物血清對體外高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF/PI3K/Akt信號通路的影響[D]. 楊敏.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]基于“陰中求陽”立法之右歸丸對糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠VEGF-VEGFR促存活信號通路的調(diào)控作用研究[D]. 李歡.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[3]紅景天苷對體外高糖缺氧環(huán)境下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞Flk-1/Akt/eNOS信號通路等影響的研究[D]. 翟仰魁.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013
[4]黃芪提取物對體外高糖培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 吳春曉.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2007
本文編號:3517432
【文章來源】:甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省
【文章頁數(shù)】:62 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
右歸丸藥物血清對大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響
右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究32表5右歸丸藥物血清對高糖缺氧模型大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(xs)相對表達(dá)量分組Np-mTORp-4EBP1HIF-1αVEGF正常組31±0.05541±0.05331±0.08661±0.1298模型組31.6536±0.0863▲1.4977±0.115▲1.7709±0.1012▲1.6389±0.1227▲高劑量組31.1335±0.0648●1.1404±0.0891●1.0225±0.0847●1.1288±0.0961●中劑量組31.3253±0.1009▲●1.3055±0.0972▲1.2052±0.0880●1.3639±0.1079▲低劑量組31.4604±0.0751▲◆1.3436±0.0984▲1.4717±0.0924▲●◆1.4617±0.1176▲注:組間兩兩比較時調(diào)整檢驗(yàn)水準(zhǔn)為a′=0.05/比較次數(shù)=0.005,,與正常組比較▲P≤0.005,與模型組比較●P≤0.005,與高劑量組比較◆P≤0.005?瞻捉M模型組圖7各組細(xì)胞蛋白表達(dá)條帶圖高劑量組GAPDHp-mTORp-4EBP1HIF-αVEGF37KD26KD26KD90KD26KD中劑量組低劑量組
右歸丸對高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路的干預(yù)作用研究40圖13mTOR/HIF-1α/VEGF信號通路示意圖4.2.3.2HIF-1α與PDR持續(xù)的氧氣供應(yīng)對于所有真核生物的正常組織發(fā)育、動態(tài)平衡和功能是必不可少的。氧是調(diào)節(jié)膜運(yùn)輸、細(xì)胞內(nèi)信號傳遞、許多基因表達(dá)和細(xì)胞存活的主要元素[65]。當(dāng)組織氧合需求超過血管供應(yīng)時,就會發(fā)生缺氧。對低氧水平的反應(yīng)是由HIF-1介導(dǎo)的。HIF-1是由氧依賴性亞基(HIF-1α)和組成性表達(dá)核亞基(HIF-1β)組成的異二聚體復(fù)合物[66],在人類中機(jī)體內(nèi),HIF1a、EPAS1和HIF3A基因分別編碼三種不同的HIF-α亞型(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)[67]。缺氧誘導(dǎo)因子-1α在所有組織中普遍表達(dá),HIF-2α主要在肺、內(nèi)皮和頸動脈表達(dá);HIF-3α主要在成人胸腺、肺、腦、心臟和腎臟中表達(dá)[68]。新生血管生成是一個涉及多種基因蛋白的復(fù)雜過程。缺氧是血管生成開關(guān)重要的誘導(dǎo)因子,HIF-1α可通過直接轉(zhuǎn)錄上調(diào)VEGF,在生成新生血管中起主導(dǎo)作用。視網(wǎng)膜是一種光敏組織,也是人體代謝最活躍的組織之一。眼球的氧氣供應(yīng)是通過脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜血管循環(huán)來調(diào)節(jié)的,這兩種血管在調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜生理方面都起著重要作用。研究表明敲除小鼠HIF-1α基因的DM小鼠模型中,VEGF和細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)的產(chǎn)生減少。與野生型小鼠相比,敲除HIF-1α基因小鼠的血管滲漏和新生血管明顯減少[69]。張瑞萍等用小分子RNA干擾DR小鼠HIF-1α,發(fā)現(xiàn)特異性沉默HIF-1α基因可減少VEGF表達(dá)抑制血管新生[70]。這些研究均表明改變HIF-1α通路可能是延緩NPDR向PDR
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]N-乙酰半胱氨酸通過AMPK/SIRT1途徑抑制缺氧誘導(dǎo)的大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[J]. 張?zhí)N,韓新生,張洪陽,徐建可. 中國動脈硬化雜志. 2020(02)
[2]小分子RNA干擾HIF-1α對糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用及機(jī)制[J]. 張瑞萍,劉紅凌. 國際眼科雜志. 2019(12)
[3]不同方法構(gòu)建的心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型[J]. 寧小偉,蘇和,張瑞芬. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(93)
[4]基于“少火生氣,壯火食氣”理論論治兒童難治性腎病綜合征[J]. 王雪峰,張秀英,王美嬌. 中醫(yī)雜志. 2019(16)
[5]基于“陰中求陽”理論探討右歸丸及其拆方對腎陽虛證大鼠睪丸組織的影響[J]. 王孫亞,李望輝,韓忠,周興,賓東華,孫貴香,何清湖. 中華中醫(yī)藥雜志. 2018(10)
[6]結(jié)合血清代謝組學(xué)與支持向量回歸機(jī)揭示右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛證的代謝標(biāo)志物群及其作用機(jī)制[J]. 陳瑞群,廖成彬,郭茜,張磊,王秀鳳. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2018(13)
[7]2型糖尿病患者中醫(yī)證候特征與視網(wǎng)膜病變進(jìn)展相關(guān)性臨床研究[J]. 王養(yǎng)忠,柳紅芳,姜旻,許家駿. 中華中醫(yī)藥雜志. 2018(03)
[8]糖基化終產(chǎn)物對糖尿病微血管病變的影響及中醫(yī)藥研究[J]. 胡秀,方朝暉. 山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2018(01)
[9]附子理中湯對脾陽虛大鼠脂質(zhì)過氧化損傷和能量代謝障礙的影響[J]. 翟美麗,于漫,劉俊蘭,王彩霞. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2017(11)
[10]糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)展的相關(guān)危險因素及防治策略[J]. 吳立巖. 中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)
碩士論文
[1]右歸丸藥物血清對體外高糖缺氧條件下大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF/PI3K/Akt信號通路的影響[D]. 楊敏.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]基于“陰中求陽”立法之右歸丸對糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠VEGF-VEGFR促存活信號通路的調(diào)控作用研究[D]. 李歡.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[3]紅景天苷對體外高糖缺氧環(huán)境下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞Flk-1/Akt/eNOS信號通路等影響的研究[D]. 翟仰魁.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013
[4]黃芪提取物對體外高糖培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 吳春曉.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2007
本文編號:3517432
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