目的:研究胃癌微環(huán)境中胃癌間充質(zhì)干細(xì)胞（Gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cells,GC-MSCs）對胃癌細(xì)胞表面分子程序性死亡受體1（Programmed death 1,PD-1）及程序性死亡受體配體1（Programmed death-ligand 1,PD-L1）表達(dá)的影響,探討GC-MSCs調(diào)節(jié)PD-L1表達(dá)過程中的重要機(jī)制,揭示GC-MSCs在腫瘤免疫逃逸中的重要作用,為闡明GC-MSCs的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:利用免疫組織化學(xué)法、Western blot檢測胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織中PD-1、PD-L1的表達(dá)情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測胃癌細(xì)胞株中PD-1、PD-L1的表達(dá)情況并利用Western blot進(jìn)行驗(yàn)證。收集胃癌間充質(zhì)干細(xì)胞的上清（Culture medium of gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cell,GCMSC-CM）及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的上清（Culture medium of bone... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1 腫瘤微環(huán)境
    1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞
        1.2.1 MSCs與腫瘤
        1.2.2 MSCs與免疫調(diào)節(jié)
    1.3 PD-1/PD-L1與腫瘤免疫
        1.3.1 PD-1/PD-L1的簡介
        1.3.2 PD-1/PD-L1與腫瘤
        1.3.3 PD-1/PD-L1與免疫抑制
    1.4 c-Myc與腫瘤
        1.4.1 c-Myc基因的簡介
        1.4.2 c-Myc與腫瘤
        1.4.3 c-Myc與PD-L1
        1.4.4 c-Myc與JQ1
    1.5 小結(jié)
第二章 研究目的、方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案和意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案
    2.4 研究意義
第三章 PD-1、PD-L1在胃癌微環(huán)境及胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)
    3.1 材料和試劑
        3.1.1 標(biāo)本采集
        3.1.2 細(xì)胞株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器及相關(guān)耗材
        3.1.5 溶液的配置
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離
        3.2.3 免疫組織化學(xué)染色
        3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)
        3.2.5 胃癌細(xì)胞株及胃癌組織中蛋白的提取
        3.2.6 蛋白免疫印跡
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 胃癌細(xì)胞株中PD-1、PD-L1的表達(dá)情況
        3.3.2 胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織中PD-1、PD-L1的表達(dá)情況
    3.4 討論
第四章 GC-MSCs對腫瘤細(xì)胞PD-L1的調(diào)控及在免疫逃逸中的作用
    4.1 材料和試劑
        4.1.1 標(biāo)本采集
        4.1.2 細(xì)胞株
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要器材
        4.1.5 相關(guān)試劑的配置
    4.2 方法
        4.2.1 GC-MSCs的分離與培養(yǎng)
        4.2.2 BM-MSCs的分離與培養(yǎng)
        4.2.3 GC-MSCs及BM-MSCs條件培養(yǎng)基的配制
        4.2.4 Western blot檢測腫瘤細(xì)胞經(jīng)GCMSC-CM處理不同時(shí)間后PD-L1的表達(dá)情況
        4.2.5 免疫熒光法驗(yàn)證SGC-7901、MGC-803 細(xì)胞經(jīng)GCMSC-CM處理 24h后PD-L1的表達(dá)
        4.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)間充質(zhì)干細(xì)胞上清刺激后胃癌細(xì)胞株P(guān)D-1、PD-L1的表達(dá)情況
        4.2.7 定量PCR檢測GCMSC-CM刺激后腫瘤細(xì)胞中PD-L1 mRNA水平的表達(dá)情況
        4.2.8 LDH法檢測活化的PBMC對GCMSC-CM處理后的腫瘤細(xì)胞MGC-803 細(xì)胞的殺傷作用
        4.2.9 結(jié)晶紫染色計(jì)數(shù)經(jīng)活化PBMC殺傷后SGC-7901、MGC-803 細(xì)胞存活情況
        4.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 GC-MSC誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)及時(shí)間依賴性
        4.3.2 GC-MSCs與BM-MSCs對腫瘤細(xì)胞PD-L1誘導(dǎo)作用的比較
        4.3.3 GC-MSCs對腫瘤細(xì)胞PD-1 表達(dá)的影響
        4.3.4 GC-MSCs誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸
    4.4 討論
第五章 GC-MSCs調(diào)控胃癌細(xì)胞PD-L1表達(dá)機(jī)制
    5.1 材料和試劑
        5.1.1 細(xì)胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要器材
    5.2 方法
        5.2.1 JQ1藥物終濃度的配制
        5.2.2 JQ1與GCMSC-CM混合培養(yǎng)基的配制
        5.2.3 Western blot檢測腫瘤細(xì)胞經(jīng)JQ1和/或GCMSC-CM作用后c-Myc、PD-L1的表達(dá)情況
        5.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)JQ1作用后胃癌細(xì)胞SGC-7901 細(xì)胞凋亡情況
        5.2.5 LDH法檢測活化的PBMC對JQ1處理后的SGC-7901 細(xì)胞殺傷作用
        5.2.6 結(jié)晶紫染色計(jì)數(shù)經(jīng)活化PBMC殺傷后SGC-7901/MGC-803 細(xì)胞存活情況
        5.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 GCMSC-CM誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞c-Myc的表達(dá)
        5.3.2 c-Myc抑制劑JQ1處理腫瘤細(xì)胞后腫瘤細(xì)胞PD-L1、c-Myc的表達(dá)情況
        5.3.3 腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)降低后逆轉(zhuǎn)GC-MSCs誘導(dǎo)的免疫逃逸
    5.4 討論
第六章 結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的的學(xué)術(shù)論文及參加的會(huì)議
    一.發(fā)表的論文
    二、會(huì)議發(fā)表論文
    三、參加會(huì)議



本文編號(hào)：3512721