目的:研究胃癌微環(huán)境中胃癌間充質干細胞（Gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cells,GC-MSCs）對胃癌細胞表面分子程序性死亡受體1（Programmed death 1,PD-1）及程序性死亡受體配體1（Programmed death-ligand 1,PD-L1）表達的影響,探討GC-MSCs調節(jié)PD-L1表達過程中的重要機制,揭示GC-MSCs在腫瘤免疫逃逸中的重要作用,為闡明GC-MSCs的免疫調節(jié)機制提供實驗依據(jù)。方法:利用免疫組織化學法、Western blot檢測胃癌組織及相應癌旁組織中PD-1、PD-L1的表達情況,流式細胞術檢測胃癌細胞株中PD-1、PD-L1的表達情況并利用Western blot進行驗證。收集胃癌間充質干細胞的上清（Culture medium of gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cell,GCMSC-CM）及骨髓間充質干細胞的上清（Culture medium of bone... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1 腫瘤微環(huán)境
    1.2 間充質干細胞
        1.2.1 MSCs與腫瘤
        1.2.2 MSCs與免疫調節(jié)
    1.3 PD-1/PD-L1與腫瘤免疫
        1.3.1 PD-1/PD-L1的簡介
        1.3.2 PD-1/PD-L1與腫瘤
        1.3.3 PD-1/PD-L1與免疫抑制
    1.4 c-Myc與腫瘤
        1.4.1 c-Myc基因的簡介
        1.4.2 c-Myc與腫瘤
        1.4.3 c-Myc與PD-L1
        1.4.4 c-Myc與JQ1
    1.5 小結
第二章 研究目的、方法、實驗設計方案和意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 實驗設計方案
    2.4 研究意義
第三章 PD-1、PD-L1在胃癌微環(huán)境及胃癌細胞株中的表達
    3.1 材料和試劑
        3.1.1 標本采集
        3.1.2 細胞株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器及相關耗材
        3.1.5 溶液的配置
    3.2 方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 健康人外周血單個核細胞的分離
        3.2.3 免疫組織化學染色
        3.2.4 流式細胞術
        3.2.5 胃癌細胞株及胃癌組織中蛋白的提取
        3.2.6 蛋白免疫印跡
    3.3 結果
        3.3.1 胃癌細胞株中PD-1、PD-L1的表達情況
        3.3.2 胃癌組織及相應癌旁組織中PD-1、PD-L1的表達情況
    3.4 討論
第四章 GC-MSCs對腫瘤細胞PD-L1的調控及在免疫逃逸中的作用
    4.1 材料和試劑
        4.1.1 標本采集
        4.1.2 細胞株
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要器材
        4.1.5 相關試劑的配置
    4.2 方法
        4.2.1 GC-MSCs的分離與培養(yǎng)
        4.2.2 BM-MSCs的分離與培養(yǎng)
        4.2.3 GC-MSCs及BM-MSCs條件培養(yǎng)基的配制
        4.2.4 Western blot檢測腫瘤細胞經(jīng)GCMSC-CM處理不同時間后PD-L1的表達情況
        4.2.5 免疫熒光法驗證SGC-7901、MGC-803 細胞經(jīng)GCMSC-CM處理 24h后PD-L1的表達
        4.2.6 流式細胞術檢測經(jīng)間充質干細胞上清刺激后胃癌細胞株PD-1、PD-L1的表達情況
        4.2.7 定量PCR檢測GCMSC-CM刺激后腫瘤細胞中PD-L1 mRNA水平的表達情況
        4.2.8 LDH法檢測活化的PBMC對GCMSC-CM處理后的腫瘤細胞MGC-803 細胞的殺傷作用
        4.2.9 結晶紫染色計數(shù)經(jīng)活化PBMC殺傷后SGC-7901、MGC-803 細胞存活情況
        4.2.10 統(tǒng)計分析
    4.3 結果
        4.3.1 GC-MSC誘導腫瘤細胞PD-L1表達及時間依賴性
        4.3.2 GC-MSCs與BM-MSCs對腫瘤細胞PD-L1誘導作用的比較
        4.3.3 GC-MSCs對腫瘤細胞PD-1 表達的影響
        4.3.4 GC-MSCs誘導腫瘤細胞發(fā)生免疫逃逸
    4.4 討論
第五章 GC-MSCs調控胃癌細胞PD-L1表達機制
    5.1 材料和試劑
        5.1.1 細胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要器材
    5.2 方法
        5.2.1 JQ1藥物終濃度的配制
        5.2.2 JQ1與GCMSC-CM混合培養(yǎng)基的配制
        5.2.3 Western blot檢測腫瘤細胞經(jīng)JQ1和/或GCMSC-CM作用后c-Myc、PD-L1的表達情況
        5.2.4 流式細胞術檢測經(jīng)JQ1作用后胃癌細胞SGC-7901 細胞凋亡情況
        5.2.5 LDH法檢測活化的PBMC對JQ1處理后的SGC-7901 細胞殺傷作用
        5.2.6 結晶紫染色計數(shù)經(jīng)活化PBMC殺傷后SGC-7901/MGC-803 細胞存活情況
        5.2.7 統(tǒng)計分析
    5.3 結果
        5.3.1 GCMSC-CM誘導腫瘤細胞c-Myc的表達
        5.3.2 c-Myc抑制劑JQ1處理腫瘤細胞后腫瘤細胞PD-L1、c-Myc的表達情況
        5.3.3 腫瘤細胞PD-L1表達降低后逆轉GC-MSCs誘導的免疫逃逸
    5.4 討論
第六章 結論與展望
    一、結論
    二、展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的的學術論文及參加的會議
    一.發(fā)表的論文
    二、會議發(fā)表論文
    三、參加會議



本文編號：3512721