目的:1.探討肝X受體（Liver X receptors,LXRs）激動(dòng)劑TO901317促進(jìn)GF誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（human bone marrow derived mesenchymal stem cells,hBMSCs）向多巴胺能神經(jīng)元（Dopaminergic neurons,DA）分化的方案。2.觀察TO901317聯(lián)合GF誘導(dǎo)hBMSCs分化的多巴胺能神經(jīng)元體外功能。3.初步探討TO901317促進(jìn)GF誘導(dǎo)hBMSCs向多巴胺能神經(jīng)元分化的機(jī)制。4.觀察TO901317聯(lián)合GF誘導(dǎo)分化的多巴胺能神經(jīng)元對(duì)6-OHDA致SD大鼠帕金森病的治療作用。方法:1.確定TO901317促進(jìn)GF誘導(dǎo)hBMSCs向多巴胺能神經(jīng)元分化的濃度、加入時(shí)間和誘導(dǎo)分化時(shí)程。（1）確定TO901317促進(jìn)GF誘導(dǎo)hBMSCs向多巴胺能神經(jīng)元分化的濃度。根據(jù)加入TO901317的濃度（0.125、0.25、0.5、1、2mM）,將h MBSCs分為五個(gè)組。各組均聯(lián)合生長(zhǎng)因子（growth factors,GF）誘導(dǎo)hBMSCs分化為多巴胺能神經(jīng)元。聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)hBMSCs分化12天后,采用免疫... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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倒置顯微鏡下觀察hBMSCs形態(tài)（200×）

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文研究獲得重慶市科技局社會(huì)事業(yè)與民生保障科技創(chuàng)新專項(xiàng)資助（No.cstc2017shms-zdyfX0053）28導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，各組細(xì)胞生存率逐漸下降（圖2）。結(jié)果表明GF會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，而TO901317對(duì)hBMSCs的細(xì)胞增殖沒(méi)有影響，但是LXR激動(dòng)劑TO901317對(duì)hBMSCs的誘導(dǎo)分化是否有作用將于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中體現(xiàn)。圖2LXR激動(dòng)劑TO901317對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.2EffectsofliverXreceptoragonistonthecellviabilityofculturedhBMSCs.DifferentconcentrationsofTO901317weresupplementedintothemediumtoexaminetheeffectofTO901317ontheviabilityofhBMSCs.(A)Culturefor3days.(B)Culturefor6days.(C)Culturefor9days.(D)Culturefor12days.Datawereexpressedasmean±SD(n=6).*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,comparedwithcontrolgroup.2.3TO901317聯(lián)合GF誘導(dǎo)hBMSCs分化的時(shí)程0.5μMTO901317聯(lián)合GF處理hBMSCs，分別在聯(lián)合誘導(dǎo)的第3天、6天、9天、12天采用免疫熒光檢測(cè)Tuj1、TH表達(dá)。統(tǒng)計(jì)各組細(xì)胞分化率。結(jié)果顯示，相比于3天、9天和12天組，0.5μMTO901317聯(lián)合GF誘導(dǎo)6天的細(xì)胞分化率可達(dá)到90%（圖3A和B）。并且隨著TO901317處理hBMSCs時(shí)間的延長(zhǎng)，誘

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文研究獲得重慶市科技局社會(huì)事業(yè)與民生保障科技創(chuàng)新專項(xiàng)資助（No.cstc2017shms-zdyfX0053）31圖30.5μMLXR激動(dòng)劑TO901317聯(lián)合GF誘導(dǎo)不同時(shí)間段，Tuj1和TH的表達(dá)Fig.3DeterminethetimeforinductionperiodofLXRagonist.(A)TheexpressionsofTuj1andTHwereshowedineachgroup.(B)CountingTH+cellsbetweengroups.Dataareexpressedasmean±SD(n=6).**P<0.01,comparedtoGFgroup,respectively.(C)Morphologicalchangesofcellsduringdifferentinductionperiods.(D)ExpressionofTHwasdetectedbyWesternblotting(n=6).***P<0.001,comparedtotheGFgroup.*P<0.05,@@P<0.01,comparedtoControlgroup(E)Bright-fieldimagesofhBMSCsindifferentgroups.2.4TO901317促進(jìn)GF誘導(dǎo)hBMSCs分化濃度篩選LXR+GF組在加入GF的前提下，分別加入0.125μM、0.25μM、0.5μM、1μM、2μM的LXR激動(dòng)劑TO901317，對(duì)hBMSCs誘導(dǎo)12天。免疫熒光檢測(cè)Tuj1、TH。結(jié)果顯示，隨著TO901317處理hBMSCs濃度的增大，TH陽(yáng)性細(xì)胞率呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，TH陽(yáng)性細(xì)胞率在0.5μM的TO901317的處理下達(dá)到高峰（圖4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]帕金森病大鼠模型的建立及其行為學(xué)評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 譚磊琦,劉亞松,沈富春,張慧民,任夢(mèng),劉長(zhǎng)青,郭俁.  齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(18)
[3]中藥誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J]. 李盛華,郭平德,王文晶.  中國(guó)骨傷. 2010(03)
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