目的:體外實(shí)驗(yàn)探索人脫細(xì)胞羊膜對(duì)牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)功能及成骨分化能力的影響方法:本實(shí)驗(yàn)采用組織塊改良培養(yǎng)法分離和培養(yǎng)牙周膜干細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)鑒定牙周膜干細(xì)胞,機(jī)械/酶消化法制備脫細(xì)胞羊膜基質(zhì),HE染色、免疫組化鑒定脫細(xì)胞情況和主要組分;倒置顯微鏡觀察以及掃描電鏡觀察脫細(xì)胞羊膜表面結(jié)構(gòu),評(píng)價(jià)脫細(xì)胞羊膜基質(zhì)作為細(xì)胞傳遞載體的潛力。利用脫細(xì)胞羊膜基質(zhì)負(fù)載牙周膜干細(xì)胞,將其分為脫細(xì)胞羊膜基質(zhì)組和TCP組（細(xì)胞培養(yǎng)板組）通過(guò),Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡率檢測(cè)、CCK8、細(xì)胞粘附、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)脫細(xì)胞羊膜對(duì)牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,通過(guò)設(shè)置TCP（-）（細(xì)胞培養(yǎng)板未誘導(dǎo)組）、TCP（O）（細(xì)胞培養(yǎng)板誘導(dǎo)液組）、HAAM（-）（脫細(xì)胞羊膜未誘導(dǎo)組）、HAAM（O）（脫細(xì)胞羊膜誘導(dǎo)液組）,采用7、14、21天ALP染色、21天茜素紅染色以及對(duì)7、14天ALP活性及21天茜素紅染色半定量,利用RT-PCR、WB檢測(cè)7、14、21天成骨相關(guān)蛋白COL1A1、ALP、OPN,以觀察不同組別的成骨分化情況。結(jié)果:牙周膜干細(xì)胞分離和提取及脫細(xì)胞羊膜基質(zhì)的制備成功。經(jīng)檢測(cè)脫... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

牙周膜干細(xì)胞原代，1代，3代培養(yǎng)情況（A:原代B:P1C:P3;標(biāo)尺100μm）

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文豐奇昊16圖2.流式細(xì)胞儀鑒定牙周膜干細(xì)胞Figure2.Identificationofperiodontalligamentstemcellsbyflowcytometry2.2脫細(xì)胞羊膜的制備與鑒定2.2.1機(jī)械/酶消化法制備羊膜宏觀視野下正常人羊膜見圖3A，為白色或淡黃色半透明膜。經(jīng)過(guò)機(jī)械/酶消化法脫細(xì)胞處理后的脫細(xì)胞羊膜見圖3B，為質(zhì)地菲薄，白色或無(wú)色的半透明膜。圖3.宏觀視野下正常人羊膜脫細(xì)胞處理前后對(duì)比（A:正常人羊膜B：脫細(xì)胞羊膜）Figure3.Comparisonofnon-acellularandacellularhumanamnion（A:humanamnioticmembraneB:Acellularamnioticmembrane）

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文豐奇昊16圖2.流式細(xì)胞儀鑒定牙周膜干細(xì)胞Figure2.Identificationofperiodontalligamentstemcellsbyflowcytometry2.2脫細(xì)胞羊膜的制備與鑒定2.2.1機(jī)械/酶消化法制備羊膜宏觀視野下正常人羊膜見圖3A，為白色或淡黃色半透明膜。經(jīng)過(guò)機(jī)械/酶消化法脫細(xì)胞處理后的脫細(xì)胞羊膜見圖3B，為質(zhì)地菲薄，白色或無(wú)色的半透明膜。圖3.宏觀視野下正常人羊膜脫細(xì)胞處理前后對(duì)比（A:正常人羊膜B：脫細(xì)胞羊膜）Figure3.Comparisonofnon-acellularandacellularhumanamnion（A:humanamnioticmembraneB:Acellularamnioticmembrane）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人脫細(xì)胞羊膜在構(gòu)建組織工程支架中的應(yīng)用及研究方向[J]. 楊繼濱,熊華章,李豫皖,劉毅.  中國(guó)組織工程研究. 2017(25)
[2]細(xì)胞外基質(zhì)材料在骨組織工程中的研究進(jìn)展[J]. 張遲,李梅,趙基源.  中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào). 2017(01)
[3]去細(xì)胞人羊膜基質(zhì)的制備及免疫原性[J]. 路欣,袁潔,郭昕悅,李衛(wèi)紅,尚宏偉,張立新,黃曉武,張海燕.  解剖學(xué)報(bào). 2016(04)
[4]Characterization of the osteogenic potential of mesenchymal stem cells from human periodontal ligament based on cell surface markers[J]. Ruth Alvarez,Hye-Lim Lee,Cun-Yu Wang,Christine Hong.  International Journal of Oral Science. 2015(04)
[5]牙周膜干細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定方法的研究進(jìn)展[J]. 王冠華.  醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐. 2014(07)
[6]人間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記分子的研究進(jìn)展[J]. 李秋晨,肖苒.  組織工程與重建外科雜志. 2013(04)
[7]脫細(xì)胞技術(shù)及其在組織工程中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 趙宇,于淼,柏樹令.  中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2013(08)
[8]牙周組織工程研究新進(jìn)展[J]. 孫路,王永蘭.  牙體牙髓牙周病學(xué)雜志. 2012(03)
[9]新型牙周再生細(xì)胞傳遞載體的體外建立[J]. 劉琪,Victor Marino,Mark Bartold.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2006(01)

博士論文
[1]間充質(zhì)干細(xì)胞在牙周組織/骨再生中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 王芳.山東大學(xué) 2011

碩士論文
[1]PLA/nHAp/HAAM復(fù)合支架的制備及性能研究[D]. 閆新宇.大連理工大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3503007