目的1.分析產(chǎn)前診斷中先天性消化道梗阻（congenital gastrointestinal obstructions,CGIO）胎兒的染色體核型結(jié)果情況;2.探究全基因組高分辨染色體微陣列（chromosome microarray analysis,CMA）技術(shù)在CGIO胎兒中的應(yīng)用價(jià)值;3.對(duì)CGIO胎兒病例的CMA結(jié)果進(jìn)行表型-基因型的關(guān)系分析,同時(shí)識(shí)別與消化道梗阻相關(guān)的拷貝數(shù)變異及候選基因;4.隨訪了解CGIO胎兒臨床結(jié)局,為提高對(duì)CGIO胎兒的認(rèn)知水平并建立先天性消化道梗阻胎兒病例的產(chǎn)前診斷及流程提供理論依據(jù)。方法1.將2012年5月到2019年5月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心產(chǎn)前診斷中心進(jìn)行侵入性產(chǎn)前診斷的203例CGIO胎兒樣本及其父母樣本納入研究。根據(jù)胎兒梗阻類型分類為:食管狹窄/閉鎖（n=27）、十二指腸狹窄/閉鎖（n=110）、小腸狹窄/閉鎖（n=38）、大腸狹窄/閉鎖（n=28）。依據(jù)超聲提示有無(wú)合并其他指標(biāo)異常分為2組,孤立性CGIO組（n=164）和復(fù)合性CGIO組（n=39,含其他結(jié)構(gòu)畸形和/或超聲軟指標(biāo)異常）。2.根據(jù)臨床知情同意及凍存樣本情況綜合考慮,分... 

【文章來(lái)源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CMA操作實(shí)驗(yàn)流程圖

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖1：CMA操作實(shí)驗(yàn)流程圖具體操作步驟如下：3.4.1樣本DNA質(zhì)控：DNA濃度實(shí)驗(yàn)范圍50-100ng/ul，純度（OD260/OD280）位于1.8-2.0之間。濃度＞100ng/ul時(shí)可加AE緩沖液稀釋。實(shí)驗(yàn)前評(píng)估樣本完整性，用1%-1.4%的瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳條帶介于10-20kb之間。無(wú)條帶者提示已降解則不進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖2：DNA電泳評(píng)估圖譜16

材料和方法3.4.4.5將混合液緩慢倒入加樣槽中，使用100ul排槍吸取90ul混合液到相對(duì)應(yīng)的孔板中，此時(shí)每孔中樣本混合物總體積為100ul；3.4.4.6膠膜密封孔板，封閉完好后震蕩混勻，2000rpm，離心1分鐘；3.4.4.7將孔板放入已預(yù)熱好的PCR儀中，運(yùn)行CytoScanPCR程序：94℃；（3min94℃30s，60℃，45s68℃）15s×30個(gè)循環(huán)；68℃；7min4℃維持。3.4.5PCR產(chǎn)物電泳質(zhì)檢3.4.5.1標(biāo)記新的8聯(lián)管，每孔各加入5ulNuclease-Freewater；3.4.5.2每份PCR產(chǎn)物中吸取3ul產(chǎn)物到對(duì)應(yīng)的8聯(lián)管中，蓋子緊閉，震蕩混勻后瞬時(shí)離心；3.4.5.3配制2%的瓊脂凝膠，將上述吸取到的8聯(lián)管產(chǎn)物稀釋液3ul加入到凝膠點(diǎn)樣孔中進(jìn)行電泳，凝膠成像并記錄，產(chǎn)物片段長(zhǎng)度應(yīng)在150-2000bp之間，如圖3。圖3：PCR產(chǎn)物電泳質(zhì)檢圖譜3.4.6PCR產(chǎn)物純化3.4.6.1將PCR產(chǎn)物中的4份擴(kuò)增物完全相對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)移至新的已標(biāo)記1.5ml離心管中；3.4.6.2從4℃冰箱中取出純化磁珠，上下混勻，并吸取720ul磁珠到各個(gè)離心管；蓋子緊閉，上下顛倒至少10次至混勻，室溫靜置10分鐘后放入離心機(jī)，16100rcf，離心3分鐘；3.4.6.3將離心管放置于磁力架上，吸棄上清液，操作過程中勿觸碰磁珠；每管加入1mlPurificationWashBuffer，插入泡沫振蕩器中，震蕩2分鐘后放入離心機(jī)，16100rcf，離心3分鐘；19

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Clinical relationship between EDN-3 gene, EDNRB gene and Hirschsprung’s disease[J]. Xiang-Long Duan Guo-Wei Li Department of General Surgery,Second Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710004,Shaanxi Province,ChinaXian-Sheng Zhang Department of Pediatric Surgery,Second Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710004,Shaanxi Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2003(12)



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