目的:前期有研究表明,Slc26a9基因的缺失會損害壁細胞的功能和生存,并且SLC26A9基因的下調導致了胃癌的發(fā)生發(fā)展。慢性萎縮性胃炎作為胃癌發(fā)生的更早事件,明確其發(fā)生及惡性轉化機制,對胃癌早期診斷與及時干預具有特殊的迫切性與重要的科學價值。本課題旨在通過胃組織特異性Slc26a9敲除小鼠明確Slc26a9基因在慢性萎縮性胃炎發(fā)生發(fā)展中的重要作用,以及SLC26A9與慢性萎縮性胃炎病人的臨床相關性。方法:1)運用qRT-PCR和IHC技術分別檢測正常人胃黏膜及慢性萎縮性胃炎患者胃黏膜SLC26A9表達情況;2)委托廣州賽業(yè)生物有限公司制備胃組織特異性Slc26a9敲除小鼠;運用PCR擴增技術、WB技術檢測小鼠胃中Slc26a9敲除情況;3)自小鼠出生后1月起,每月測量Slc26a9^fl/fl和Slc26a9^fl/fl/Atp4b-Cre小鼠體重,計算小鼠生存率并繪制曲線;4)運用H&E染色技術觀察了Slc26a9^fl/fl和Slc26a9^fl/fl/Atp4b-Cre小鼠自出生后8天到18... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SLC26A9的下調與人類慢性萎縮性胃炎的發(fā)生有關

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文袁都敏28圖2.將Slc26a9fl/fl小鼠與Atp4b-Cre小鼠雜交，獲得胃特異性Slc26a9基因敲除小鼠。(A)胃特異性Slc26a9基因敲除(Slc26a9fl/fl/Atp-4b)小鼠基因敲除模式圖。Slc26a9Wildtype（WT）等位基因的基因組結構示意圖，Slc26a9基因敲除靶向結構示意圖，Slc26a9靶向等位基因示意圖以及Slc26a9缺失基因結構示意圖如圖所示。Loxp、Frt和新霉素位點已標明。(B)通過PCR擴增驗證Slc26a9fl/fl和Slc26a9fl/fl/Atp4b-Cre小鼠基因型。Slc26a9WT、Slc26a9fl/fl和Atp4b-Cre等位基因擴增片段分別為247bp、304bp和800bp。(C)WB檢測小鼠胃組織中Slc26a9的表達水平。Loxp:X-overP1基因座；Cre：導致重組。Frt：Flp識別目標：Neor：新霉素。Figure2.Slc26a9fl/flmicewerecrossedwithAtp4b-Cremicetoproducetheparietalcells-specificSlc26a9knockoutinSlc26a9fl/fl/Atp4b-Cremice.(A)GenerationofSlc26a9fl/fl/Atp4b-Cremice.SchematicrepresentationofgenomicstructureofSlc26a9Wildtype(WT)allele,Slc26a9genetargetingconstruct,Slc26a9targetedallele,andSlc26a9nullallele.Loxp,FrtandNeomycinsitesareindicated.(B)GenotypesofSlc26a9fl/fl/Atp4b–Cre,Slc26a9WTandSlc26a9fl/flmiceweredeterminedbyPCRamplification.Slc26a9WT,Slc26a9fl/fl,andAtp4b-Crealleleswereevidencedbyamplificationin247bp,304bp,and800bpfragments,respectively.(C)Slc26a9expressioninthestomachofSlc26a9fl/fl/Atp4b-CremiceandSlc26a9fl/flmiceweredetectedbyWesternblot.Loxp:LocusofX-overP1;Cre:Causesrecombination.Frt:Flprecognitiontarget;Neor:Neomycin2.3壁細胞特異性Slc26a9基因缺失對小鼠生長和生存無影響自小

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文袁都敏29圖3.壁細胞特異性敲除Slc26a9基因對小鼠生長和生存無明顯影響。(A)每月檢測Slc26a9fl/fl/Atp-4b和Slc26a9fl/fl小鼠體重(g)記錄并繪制曲線，差異不具有統(tǒng)計學意義；(B)Slc26a9fl/fl/Atp-4b和Slc26a9fl/fl小鼠在出生后18個月內的存活率沒有明顯差異。Figure3.Parietalcell-specificSlc26a9deletioncausednosignificanteffectonweightandsurvivalratio.(A)Thebodyweight(g)ofSlc26a9fl/fl/Atp-4bandSlc26a9fl/flmicewererecordedmonthly,thedifferencewasnotstatisticallysignificant;(B)ThereisnosignificantdifferenceofsurvivalratiobetweenSlc26a9fl/fl/Atp-4bandSlc26a9fl/flmiceafterbirth.2.4壁細胞特異性Slc26a9基因缺失可導致小鼠胃粘膜出現(xiàn)自發(fā)性慢性萎縮性胃炎，腸化生及惡性病理進程的發(fā)生Slc26a9fl/fl和Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠的胃組織病理學評價根據(jù)羅杰斯發(fā)布的評分系統(tǒng)進行[21]。雜合子小鼠的組織病理學評分與對照組小鼠幾乎相同。病理組織學觀察發(fā)現(xiàn)，Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠出生后第8天胃粘膜與Slc26a9fl/fl小鼠無明顯差異；但1個月時在Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠胃黏膜觀察到壁細胞缺失，2個月時觀察到腺拉長、擴張，并伴隨著泌酸腺體的萎縮（壁細胞和主細胞缺失)，6個月時觀察到粘液細胞化生，包括表達痙攣多肽的上皮化生(SPEM)和腸上皮化生(IM)（圖4A）。出生后18個月，Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠胃形態(tài)幾乎是同齡Slc26a9fl/fl小鼠大小的2倍（圖4B）。所有Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠(20/20)胃黏膜表現(xiàn)出嚴重的胃腫瘤的癌前病變的表現(xiàn)包括慢性萎縮性胃炎(CAG)，粘液細胞化生以及深的囊腫形成。最終，發(fā)展為高級別上皮內瘤變(HGIN)，這被認為是早期GC[21,22](圖

【參考文獻】：
期刊論文
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