發(fā)布時間：2021-11-01 05:25

　　背景:缺血再灌注損傷（Ischemia/reperfusion injury,IRI）是引起急性腎損傷的主要原因。近年來的研究發(fā)現(xiàn)骨髓間充質干細胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）在心肌、腦、腎的缺血再灌注損傷中起保護性作用,并且證實這種保護性作用是由BMSCs旁分泌的外泌體所介導。外泌體是一種直徑為40-200nm的細胞外囊泡,能夠選擇性地包裹多種生物活性物質,其中包括microRNA（miRNA）。最近的研究發(fā)現(xiàn)人骨髓間充質干細胞來源的外泌體（Exosomes secreted from human-bone-marrow-derived mesenchymal stem cells,hBMSC-Exos）中富含miR-199a-3p,并且有研究報道m(xù)iR-199a-3p在IRI過程中起著重要的調控作用,但其在腎IRI中的作用卻未見報道。目的:探究hBMSC-Exos在腎IRI中的保護性作用,明確外泌體中的miR-199a-3p在該過程中的重要作用并闡明其可能的調控機制。方法:采用超速離心法提取hBMSC-Exos,... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

hBMSC-Exos的鑒定（A）透射電子顯微鏡（B）納米顆粒追蹤分析（C）WesternblotFigure1.1IdentificationofhBMSC-Exos.(A)MorphologyofhBMSC-Exoswasdetectedby

hBMSC-Exos的攝取（A）HK-2細胞對hBMSC-Exos的攝�。˙）腎臟組織對hBMSC-Exos的攝取Figure1.2InternalizationofhBMSC-Exos.(A)hBMSC-ExosweremarkedwiththegreenfluorescentdyePKH67andcytoskeletonandnucleiofHK-2cellswerestainedwithActinRedandDAPI.Laserscanningconfocalmicroscopewasusedtoobserve.Scalebar=10μm(original

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文25同時，我們還檢測了幾種凋亡相關蛋白，Westernblot的結果表明，HK-2接受OGD/R處理后促凋亡蛋白Cleavedcaspase-3和Bax的表達水平顯著上升，而抗凋亡蛋白Bcl-2的水平明顯下降，但在接受hBMSCs共培養(yǎng)或hBMSC-Exos處理后能逆轉這樣的蛋白表達變化。此外，我們還發(fā)現(xiàn)在non-exoCM組的抗凋亡效果明顯弱于hBMSCs共培養(yǎng)和hBMSC-Exos處理組，這意味著hBMSCs的保護性作用是由其分泌的外泌體所介導。綜上所述，hBMSC-Exos能抑制H/R引起的HK-2細胞凋亡，從而起著保護性作用。（圖1.3）圖1.3hBMSC-Exos通過抑制HK-2細胞凋亡在H/R中起保護性作用（A）hBMSC-Exos抑制細胞凋亡（B）統(tǒng)計分析（C）hBMSC-Exos調控凋亡相關蛋白的表達Figure1.3hBMSC-ExoskeepHK-2cellsfromH/Rinjurybysuppressingapoptosis.(A)HK-2cellswerecoculturedwithhBMSCsortreatedwithnon-exoCMorhBMSC-ExosandthenexposedtoOGD/Rtreatment.TheapoptoticproportionofHK-2cellswasdetectedbyflowcytometry.(B)Thestatisticalgraphofcellapoptosis(n=3)(*p<0.05hBMSCsversusnon-hBMSCs,hBMSC-Exosversusnon-hBMSCs,hBMSC-Exosversusnon-exoCM,**p<0.01non-hBMSCsversuscontrol).(C)HK-2cellscoculturedwithhBMSCsortreatedwithnon-exoCMorhBMSC-ExosandthensubjectedtoOGD/Rtreatment.Then,thewholeproteinswereextractedandpreparedtodetectCleavedcaspase-3,Bax,andBcl-2expressionbywesternblotting.


本文編號：3469583