本文關(guān)鍵詞：基于氧化還原電位建立測定血清抗氧化能力的方法，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本文基于氧化還原反應原理和氧化還原電位(Oxidation Reduction Potential ORP),建立了三種準確,靈敏,精密度良好的測定人血清抗氧化能力的方法,以達到對機體氧化還原狀態(tài)進行評價的目的。運用所建立的三種方法對2型糖尿病(T2DM)人的血清抗氧化能力進行測定,采用等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)分析2型糖尿病人CETP基因TaqIB位點的多態(tài)性,旨在探討機體抗氧化能力及CETP基因TaqIB多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性,評估兩者對2型糖尿病的危險性。方法:1.基于氧化還原電對(I2/KI)濃度比的對數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈線性關(guān)系,血清與已知固定濃度比的I2/KI電對液反應后,電對液ORP值發(fā)生改變建立方法1。用血清和維生素C與I2/KI電對液進行反應,評價方法的準確性。按照NCCLS的EP5文件評價方法1的精密度。并測定糖尿病人的血清抗氧化能力來驗證該方法潛在的臨床應用價值。2.基于氧化還原電對(Fe3+/Fe2+)濃度比的對數(shù)與氧化還原電位(ORP)呈線性關(guān)系,血清與已知固定濃度比的Fe3+/Fe2+電對液反應后,電對液ORP值發(fā)生改變建立方法2。用血清和維生素C與Fe3+/Fe2+電對液進行反應,評價方法的準確性。多因素線性回歸分析實驗評價各因素對方法2的影響。并測定糖尿病人的血清抗氧化能力來驗證該方法的潛在臨床應用價值。3.基于氧化劑過氧化氫(h2o2)濃度的對數(shù)與氧化還原電位(orp)呈線性關(guān)系,血清與已知固定濃度的過氧化氫反應后,電對液orp值發(fā)生改變來建立方法3。用血清和維生素c與過氧化氫進行反應,評價方法3的準確性。多因素線性回歸分析實驗評價各因素對方法3的影響。并測定糖尿病人的血清抗氧化能力來驗證該方法的潛在臨床應用價值。4.從醫(yī)院采集30例2型糖尿病人和30例健康體檢者的血清,運用所建立的三種方法測定這兩組人群的血清抗氧化能力。采用等位基因特異性pcr技術(shù)(as-pcr)檢測2型糖尿病人和健康體檢組cetp基因taqib位點的多態(tài)性,探討機體抗氧化能力及cetp基因taqib多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性。結(jié)果:1.氧化還原電對(i2/ki)濃度比的對數(shù)與氧化還原電位(orp)呈線性關(guān)系(r2=0.9970)。在電對液存在的條件下,血清與orp呈線性關(guān)系(r2=0.9997),維生素c與orp呈線性關(guān)系(r2=0.9980)。精密度結(jié)果為100%血清水平批內(nèi)cv為0.20%,批間cv為0.21%,天間cv為0.43%;50%血清水平批內(nèi)cv為0.11%,批間cv為0.12%,天間cv為0.39%。糖尿病組和健康體檢組的orp值,糖尿病組為385.40±5.93mv,正常對照組為380.72±5.54mv。結(jié)果有統(tǒng)計學差異(p0.05)。2.氧化還原電對(fe3+/fe2+)濃度比的對數(shù)與氧化還原電位(orp)呈線性關(guān)系(r2=0.9987)。在電對液存在的條件下,血清與orp呈線性關(guān)系(r2=0.9700),維生素c與orp呈線性關(guān)系(r2=0.9960)。多因素線性回歸分析實驗,血清、fe3+、fe2+三個變量對于orp值的貢獻,均具有統(tǒng)計學意義(p0.05),其中fe3+與orp呈正相關(guān),其貢獻最大(β=0.7890),血清和fe2+與orp呈反相關(guān)。糖尿病組和健康體檢組的orp值,糖尿病組為399.17±10.99mv,正常對照組為392.60±8.36mv,差別有統(tǒng)計學意義(p0.01)。3.氧化劑過氧化氫(h2o2)的濃度的對數(shù)與氧化還原電位(orp)呈線性關(guān)系(r2=0.9991)。在過氧化氫存在的條件下,血清與orp呈線性關(guān)系(r2=0.9890),維生素c與orp呈線性關(guān)系(r2=0.9750)。多因素線性回歸分析實驗,血清、過氧化氫、重復次數(shù)三個變量中,血清和過氧化氫對于orp值的貢獻具有統(tǒng)計學意義(p0.05),重復次數(shù)無統(tǒng)計學意義(p=0.061)。其中血清與orp呈負相關(guān),貢獻最大(β=-0.757),過氧化氫與ORP呈正相關(guān)。糖尿病組和健康體檢組的ORP值,糖尿病組為384.35±11.23 mv,正常對照組為380.67±8.98 mv,差別有統(tǒng)計學意義(P=0.015)。4.三種方法測定的30例2型糖尿病人血清抗氧化能力明顯低于30例健康體檢者血清抗氧化能力,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在兩組中,TaqIB位點可檢測出B1B1,B1B2,B2B2三種基因型,基因型頻率(χ2=1.153)及等位基因頻率(χ2=0)在兩組間分布均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。Logistic回歸分析表明CETP基因TaqIB突變位點與2型糖尿病無明顯相關(guān),血清抗氧化能力為2型糖尿病的危險因素(OR=1.029,95%CI:1.011~1.048)。結(jié)論:1.初步建立了三種利用加入氧化還原電對液或過氧化氫并結(jié)合氧化還原電位(ORP)測定血清抗氧化能力的方法,方法適用于測定人血清抗氧化能力,具有潛在的臨床應用價值。2.2型糖尿病人血清抗氧化能力明顯低于健康體檢人群,機體抗氧化能力為2型糖尿病的危險因素,提示2型糖尿病與機體抗氧化能力有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：氧化還原電位(ORP) 氧化還原電對 2型糖尿病 抗氧化能力血清 CETP基因TaqIB多態(tài)性
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R446.11
【目錄】：

• 中文摘要9-12
• 英文摘要12-16
• 前言16-24
• 參考文獻20-24
• 第一章 基于氧化還原電位和氧化還原電對(I_2/KI)測定人血清抗氧化能力24-36
• （一）材料與方法25-27
• 1. 材料25
• 1.1 儀器25
• 1.2 試劑25
• 2. 方法25-27
• 2.1 建立碘/碘化鉀(I_2/KI)電對法25-27
• 2.2 碘/碘化鉀(I_2/KI)電對法測定臨床血清標本27
• 2.3 統(tǒng)計學處理27
• （二）結(jié)果27-32
• （三）討論32-34
• （四）參考文獻34-36
• 第二章 基于氧化還原電位和氧化還原電對(Fe~(3+)/Fe~(2+))測定人血清抗氧化能力36-48
• （一）材料與方法37-39
• 1. 材料37
• 1.1 儀器37
• 1.2 試劑37
• 2. 方法37-39
• 2.1 建立Fe~(3+)/Fe~(2+)電對法37-38
• 2.2 Fe~(3+)/Fe~(2+)電對法測定臨床血清標本38-39
• 2.3 統(tǒng)計學處理39
• （二）結(jié)果39-44
• （三）討論44-46
• （四）參考文獻46-48
• 第三章 基于氧化還原電位建立過氧化氫(H_2O_2)電位法測定人血清抗氧化能力48-61
• （一）材料與方法49-52
• 1. 材料49
• 1.1 儀器49
• 1.2 試劑49
• 2. 方法49-52
• 2.1 建立過氧化氫(H_2O_2)電位法49-51
• 2.2 過氧化氫(H_2O_2)電位法測定臨床血清標本51
• 2.3 統(tǒng)計學處理51-52
• （二）結(jié)果52-57
• （三）討論57-59
• （四）參考文獻59-61
• 第四章 機體抗氧化能力及CETP基因TaqIB多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性61-72
• （一）材料與方法61-65
• 1. 材料61-62
• 1.1 實驗對象61-62
• 1.2 儀器62
• 1.3 試劑62
• 2. 方法62-65
• 2.1 人血清抗氧化能力的測定62
• 2.2 CETP基因TaqIB多態(tài)性檢測62-65
• 2.3 統(tǒng)計學處理65
• （二）結(jié)果65-69
• （三）討論69-70
• （四）參考文獻70-72
• 全文總結(jié)72-73
• 工作展望73-74
• 綜述74-86
• 參考文獻80-86
• 附錄86-87
• 致謝87-88

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本文編號：345858