目的:探索金釵石斛生物堿（Dendorbium Nobile Lindl.alkaloids,DNLA）對脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的BV2細胞炎癥反應(yīng)的保護作用及其作用機制。方法:以BV2細胞與LPS共同孵育構(gòu)建神經(jīng)細胞炎癥模型。將BV2隨機分為空白組,DNLA（350 ng/mL）單獨給藥組,LPS（100 ng/mL）組,LPS+DNLA（3.5 ng/mL）組和LPS+DNLA（350 ng/mL）組。給予同體積無血清培養(yǎng)基和各濃度DNLA預(yù)處理1h,加入LPS（100 ng/mL）誘導(dǎo)BV2細胞,使其激活并產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。通過MTT法檢測BV2細胞的增殖篩選最佳造模濃度;ELISA法檢測細胞上清液中TNF-α的釋放量確定篩選造模時間;Western Blot檢測細胞總蛋白裂解液中Iba-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、NEK7、GSDMD,以及胞漿蛋白提取液和胞核蛋白提取液中NF-κB p65及其磷酸化產(chǎn)物p-NF-κB p65、κBα及其磷酸化產(chǎn)物p-IκBα的蛋白表達水平;IF技術(shù)檢測Iba-1蛋白變化、NF-κB在BV2細胞核內(nèi)... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NLRP3調(diào)控炎癥反應(yīng)

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉姣姣17時間和濃度增加，細胞突起逐漸增加，胞體逐漸增大，細胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變。此外，用LPS(100ng/mL)分別處理BV2細胞15min、30min和60min，分別提取胞漿蛋白和胞核蛋白，測定IκBα和NF-κB以及二者磷酸化蛋白表達變化，如圖5、圖6所示，在60min時，蛋白表達水平出現(xiàn)顯著性差異。圖2不同濃度LPS對BV2細胞活性的影響注：*p<0.05vs.空白組。Fig.2.EffectsofLPSonthecellviabilityofBV2.CellswerestimulatedbyLPS(10,100,and1000ng/mL)for3hor6h.Resultswerethemean±SEMfromsevenindependentexperimentsperformedinsextuplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.圖3LPS影響不同時間點細胞上清中TNF-α含量注：*p<0.05vs.空白組。Fig.3.TNF-αproductioninculturalsupernatantswereaffectedbyLPSatdifferenttimepoints.Dataexpressedasmean±SEMfromthreeindependentexperimentsimplementedintriplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉姣姣17時間和濃度增加，細胞突起逐漸增加，胞體逐漸增大，細胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變。此外，用LPS(100ng/mL)分別處理BV2細胞15min、30min和60min，分別提取胞漿蛋白和胞核蛋白，測定IκBα和NF-κB以及二者磷酸化蛋白表達變化，如圖5、圖6所示，在60min時，蛋白表達水平出現(xiàn)顯著性差異。圖2不同濃度LPS對BV2細胞活性的影響注：*p<0.05vs.空白組。Fig.2.EffectsofLPSonthecellviabilityofBV2.CellswerestimulatedbyLPS(10,100,and1000ng/mL)for3hor6h.Resultswerethemean±SEMfromsevenindependentexperimentsperformedinsextuplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.圖3LPS影響不同時間點細胞上清中TNF-α含量注：*p<0.05vs.空白組。Fig.3.TNF-αproductioninculturalsupernatantswereaffectedbyLPSatdifferenttimepoints.Dataexpressedasmean±SEMfromthreeindependentexperimentsimplementedintriplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Sex Differences in Neuropathology and Cognitive Behavior in APP/PS1/tau Triple-Transgenic Mouse Model of Alzheimer’s Disease[J]. Jun-Ting Yang,Zhao-Jun Wang,Hong-Yan Cai,Li Yuan,Meng-Ming Hu,Mei-Na Wu,Jin-Shun Qi.  Neuroscience Bulletin. 2018(05)

碩士論文
[1]金釵石斛總生物堿對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶影響及其相關(guān)因素研究[D]. 楊小惠.遵義醫(yī)學(xué)院 2017
[2]金釵石斛總生物堿對ApoE-/-小鼠高血脂和血管動脈粥樣硬化的影響[D]. 陳晶.遵義醫(yī)學(xué)院 2016



本文編號：3450956