目的:探討瞬時(shí)受體電位離子通道TRPM7（Transient Receptor Potential Melastatin 7）在人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞中是否表達(dá),以及抑制TRPM7離子通道后對(duì)人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞增殖和遷移的影響。方法:本實(shí)驗(yàn)所采用的組織來(lái)源于西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院口腔頜面外科手術(shù)室,采用組織塊法體外培養(yǎng)人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞。1.分離純化后經(jīng)免疫熒光染色鑒定是否為成纖維細(xì)胞;2.接著采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和免疫熒光法檢測(cè)人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞中TRPM7離子通道的表達(dá),全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞TRPM7離子通道的全細(xì)胞電流;3.將培養(yǎng)的細(xì)胞設(shè)置為3組:對(duì)照組、TRPM7shRNA組和2-APB組。對(duì)照組為正常培養(yǎng)的人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞,不做特殊處理。TRPM7 shRNA組應(yīng)用TRPM7 shRNA病毒轉(zhuǎn)染人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞,48 h后倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果,再次采用RT-PCR檢測(cè)TRPM7離子通道的表達(dá),驗(yàn)證TRPM7離子通道是否抑制成功,采用全細(xì)胞膜片鉗記錄TRPM7 shRNA組人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞的全細(xì)胞電流... 

【文章來(lái)源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)（40×）

-26-圖1.2第3代成纖維細(xì)胞（40×）Fig1.2Fibroblastsofthethirdgeneration(40×)1.3免疫熒光法鑒定成纖維細(xì)胞對(duì)純化后的第3代人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色鑒定，在綠光激發(fā)下，倒置熒光顯微鏡下顯示：波形蛋白組成纖維細(xì)胞能夠被成纖維細(xì)胞的結(jié)構(gòu)蛋白即波形蛋白的一抗結(jié)合，并在熒光顯微鏡綠光激發(fā)下呈紅色，而角蛋白14組成纖維細(xì)胞不被上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)蛋白即角蛋白14的一抗結(jié)合，所以不被染色，DAPI染色使細(xì)胞核發(fā)出藍(lán)色熒光，呈卵圓形。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本實(shí)驗(yàn)分離得到的成纖維細(xì)胞波形蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性（圖1.3A），角蛋白表達(dá)呈陰性（圖1.3B），符合成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特征。

免疫熒

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]瞬時(shí)受體電位通道TRPM7在人鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞遷移能力影響的初步研究[D]. 陳健鵬.南方醫(yī)科大學(xué) 2010
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碩士論文
[1]瞬時(shí)受體電位M7通道在喉癌及癌旁組織表達(dá)差異的初步研究[D]. 任曉彤.南方醫(yī)科大學(xué) 2014
[2]TRPM7對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控機(jī)制研究[D]. 于明哲.安徽醫(yī)科大學(xué) 2013



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