發(fā)布時(shí)間：2021-09-05 01:55

　　目的:白細(xì)胞介素4（Interleukin-4,IL-4）能減輕大鼠肝移植后的缺血再灌注及免疫排斥反應(yīng),但具體機(jī)制仍不清除。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄因子6（signal transducers and activators of transcription 6,STAT6）和含十字形結(jié)構(gòu)域蛋白3（Jumonji domain containing 3,JMJD3）在巨噬細(xì)胞極化中發(fā)揮重要作用。本研究主要探討Kupffer細(xì)胞（KCs）及STAT6-JMJD3信號(hào)通路在大鼠肝移植后肝臟缺血再灌注中的作用。方法:建立大鼠肝移植模型（Liver transplantation,LT）,分為Sham組、LT組、LT+NS組,LT+IL-4組。LT+NS組和LT+IL-4組供體大鼠肝臟在冷存儲(chǔ)期間,分別通過(guò)門靜脈持續(xù)微量灌注生理鹽水（Normal saline,NS）及溶于生理鹽水中的IL-4。術(shù)后6小時(shí)檢測(cè)肝功、病理改變、細(xì)胞凋亡及炎癥的變化情況。分離各組肝移植后肝臟的KCs,流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、RT-PCR及Western Blot檢測(cè)KCs極化及STAT6-JMJD3通路的變化。在體外實(shí)驗(yàn)中:分離得到K... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

IL-4減輕大鼠肝移植6小時(shí)后缺血再灌注損傷

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22TUNEL檢測(cè)Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組在肝移植后6小時(shí)肝臟凋亡水平，與Sham組相比，肝移植后6小時(shí)肝臟組織中發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)明顯增加。LT組和LT+NS組的凋亡數(shù)量無(wú)明顯差異，但是，對(duì)LT+IL-4組中的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該組的凋亡細(xì)胞明顯降低(圖2A、B)。對(duì)四組中肝臟組織中的凋亡相關(guān)蛋白表水平進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，肝移植后，肝臟組織中抗凋亡蛋Bcl2水平明顯減少，而促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明顯增加。灌注生理鹽水對(duì)肝移植造成的凋亡無(wú)明顯影響。但是IL-4處理能明顯減少促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明，同時(shí)增加肝臟組織中抗凋亡蛋Bcl2水平（圖２C）。圖2.IL-4降低大鼠肝移植6小時(shí)后肝臟細(xì)胞凋亡水平。A-B：熒光TUNEL檢測(cè)各組肝臟凋亡細(xì)胞水平并計(jì)數(shù)（200×）；C：WesternBlot檢測(cè)各組肝組織凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平并行相對(duì)定量分析。*P<0.05,與Sham比較；#P<0.05，與LT+IL-4比較。Figure2.IL-4suppressedapoptosisat6hoursafterratlivertransplantation.A-B:FluorescentTUNELwasusedtoinvestigatecellapoptosisinspecimensofeachgroup(200×);C:TheproteinsrelatedtoapoptosisinliverswastestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.2.2IL-4減輕大鼠肝移植后的炎癥水平

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文23分別檢測(cè)Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組中肝臟組織中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平發(fā)現(xiàn)肝移植后肝臟中上述促炎因子水平明顯增加，持續(xù)緩慢灌注NS對(duì)炎癥因子的mRNA水平無(wú)明顯變化，而持續(xù)緩慢灌注IL-4能降低上述因子的mRNA水平（圖3A）。進(jìn)一步檢測(cè)各組肝臟組織中IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平檢測(cè)也發(fā)現(xiàn),與LT、LT+NS組相比，IL-4的處理能明顯降低IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平（圖3B）。因此通過(guò)對(duì)供體肝臟持續(xù)灌注IL-4能降低肝移植后肝臟中的炎癥反應(yīng)。圖3.IL-4減輕大鼠肝移植6小時(shí)后的炎癥水平。A：RT-PCR檢測(cè)術(shù)后6小時(shí)肝臟中的炎癥因子的mRNA水平；B：WesternBlot檢測(cè)術(shù)后6小時(shí)肝組織炎癥相關(guān)蛋白的水平及相對(duì)定量分析。*P<0.05,與Sham比較；#P<0.05，與LT+IL-4比較。Figure3.IL-4couldsuppressinflammationat6hoursafterratlivertransplantation.A:ThemRNAofinflammatorycytokineswasdetectedbyRT-PCR;B:TheproteinsrelatedtoinflammationweretestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.3IL-4能促進(jìn)肝移植后KCsM2型極化，同時(shí)激活KCs中的STAT6-JMJD3信號(hào)通路2.3.1IL-4促進(jìn)肝移植后KCs向M2型極化分離Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組的肝移植后6小時(shí)的KCs并檢測(cè)M2型KCs的比例變化。流式細(xì)胞結(jié)果顯示：與Sham組相比，LT、LT+NS組中M2型KCs比例增加不明顯，但LT+IL-4組中M2型KCs比例明顯增加（圖4A）。RT-PCR檢測(cè)M1型和M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記基因TNF-α、iNOS、Retnla、Arg1的


本文編號(hào)：3384440