IL-4通過STAT6-JMJD3通路誘導Kupffer細胞M2極化減輕大鼠肝移植術后缺血再灌注損傷
發(fā)布時間：2021-09-05 01:55
目的:白細胞介素4（Interleukin-4,IL-4）能減輕大鼠肝移植后的缺血再灌注及免疫排斥反應,但具體機制仍不清除。信號轉導及轉錄因子6（signal transducers and activators of transcription 6,STAT6）和含十字形結構域蛋白3（Jumonji domain containing 3,JMJD3）在巨噬細胞極化中發(fā)揮重要作用。本研究主要探討Kupffer細胞（KCs）及STAT6-JMJD3信號通路在大鼠肝移植后肝臟缺血再灌注中的作用。方法:建立大鼠肝移植模型（Liver transplantation,LT）,分為Sham組、LT組、LT+NS組,LT+IL-4組。LT+NS組和LT+IL-4組供體大鼠肝臟在冷存儲期間,分別通過門靜脈持續(xù)微量灌注生理鹽水（Normal saline,NS）及溶于生理鹽水中的IL-4。術后6小時檢測肝功、病理改變、細胞凋亡及炎癥的變化情況。分離各組肝移植后肝臟的KCs,流式細胞計數(shù)儀、RT-PCR及Western Blot檢測KCs極化及STAT6-JMJD3通路的變化。在體外實驗中:分離得到K...
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市
【文章頁數(shù)】：52 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
IL-4減輕大鼠肝移植6小時后缺血再灌注損傷
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文22TUNEL檢測Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組在肝移植后6小時肝臟凋亡水平，與Sham組相比，肝移植后6小時肝臟組織中發(fā)生凋亡的細胞數(shù)明顯增加。LT組和LT+NS組的凋亡數(shù)量無明顯差異，但是，對LT+IL-4組中的檢測結果發(fā)現(xiàn)，該組的凋亡細胞明顯降低(圖2A、B)。對四組中肝臟組織中的凋亡相關蛋白表水平進行檢測發(fā)現(xiàn)，肝移植后，肝臟組織中抗凋亡蛋Bcl2水平明顯減少，而促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明顯增加。灌注生理鹽水對肝移植造成的凋亡無明顯影響。但是IL-4處理能明顯減少促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明，同時增加肝臟組織中抗凋亡蛋Bcl2水平（圖２C）。圖2.IL-4降低大鼠肝移植6小時后肝臟細胞凋亡水平。A-B：熒光TUNEL檢測各組肝臟凋亡細胞水平并計數(shù)（200×）；C：WesternBlot檢測各組肝組織凋亡相關蛋白的表達水平并行相對定量分析。*P<0.05,與Sham比較；#P<0.05，與LT+IL-4比較。Figure2.IL-4suppressedapoptosisat6hoursafterratlivertransplantation.A-B:FluorescentTUNELwasusedtoinvestigatecellapoptosisinspecimensofeachgroup(200×);C:TheproteinsrelatedtoapoptosisinliverswastestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.2.2IL-4減輕大鼠肝移植后的炎癥水平
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文23分別檢測Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組中肝臟組織中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平發(fā)現(xiàn)肝移植后肝臟中上述促炎因子水平明顯增加，持續(xù)緩慢灌注NS對炎癥因子的mRNA水平無明顯變化，而持續(xù)緩慢灌注IL-4能降低上述因子的mRNA水平（圖3A）。進一步檢測各組肝臟組織中IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平檢測也發(fā)現(xiàn),與LT、LT+NS組相比，IL-4的處理能明顯降低IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平（圖3B）。因此通過對供體肝臟持續(xù)灌注IL-4能降低肝移植后肝臟中的炎癥反應。圖3.IL-4減輕大鼠肝移植6小時后的炎癥水平。A：RT-PCR檢測術后6小時肝臟中的炎癥因子的mRNA水平；B：WesternBlot檢測術后6小時肝組織炎癥相關蛋白的水平及相對定量分析。*P<0.05,與Sham比較；#P<0.05，與LT+IL-4比較。Figure3.IL-4couldsuppressinflammationat6hoursafterratlivertransplantation.A:ThemRNAofinflammatorycytokineswasdetectedbyRT-PCR;B:TheproteinsrelatedtoinflammationweretestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.3IL-4能促進肝移植后KCsM2型極化，同時激活KCs中的STAT6-JMJD3信號通路2.3.1IL-4促進肝移植后KCs向M2型極化分離Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組的肝移植后6小時的KCs并檢測M2型KCs的比例變化。流式細胞結果顯示：與Sham組相比，LT、LT+NS組中M2型KCs比例增加不明顯，但LT+IL-4組中M2型KCs比例明顯增加（圖4A）。RT-PCR檢測M1型和M2型巨噬細胞標記基因TNF-α、iNOS、Retnla、Arg1的
本文編號：3384440
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市
【文章頁數(shù)】：52 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
IL-4減輕大鼠肝移植6小時后缺血再灌注損傷
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文22TUNEL檢測Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組在肝移植后6小時肝臟凋亡水平，與Sham組相比，肝移植后6小時肝臟組織中發(fā)生凋亡的細胞數(shù)明顯增加。LT組和LT+NS組的凋亡數(shù)量無明顯差異，但是，對LT+IL-4組中的檢測結果發(fā)現(xiàn)，該組的凋亡細胞明顯降低(圖2A、B)。對四組中肝臟組織中的凋亡相關蛋白表水平進行檢測發(fā)現(xiàn)，肝移植后，肝臟組織中抗凋亡蛋Bcl2水平明顯減少，而促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明顯增加。灌注生理鹽水對肝移植造成的凋亡無明顯影響。但是IL-4處理能明顯減少促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明，同時增加肝臟組織中抗凋亡蛋Bcl2水平（圖２C）。圖2.IL-4降低大鼠肝移植6小時后肝臟細胞凋亡水平。A-B：熒光TUNEL檢測各組肝臟凋亡細胞水平并計數(shù)（200×）；C：WesternBlot檢測各組肝組織凋亡相關蛋白的表達水平并行相對定量分析。*P<0.05,與Sham比較；#P<0.05，與LT+IL-4比較。Figure2.IL-4suppressedapoptosisat6hoursafterratlivertransplantation.A-B:FluorescentTUNELwasusedtoinvestigatecellapoptosisinspecimensofeachgroup(200×);C:TheproteinsrelatedtoapoptosisinliverswastestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.2.2IL-4減輕大鼠肝移植后的炎癥水平
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文23分別檢測Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組中肝臟組織中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平發(fā)現(xiàn)肝移植后肝臟中上述促炎因子水平明顯增加，持續(xù)緩慢灌注NS對炎癥因子的mRNA水平無明顯變化，而持續(xù)緩慢灌注IL-4能降低上述因子的mRNA水平（圖3A）。進一步檢測各組肝臟組織中IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平檢測也發(fā)現(xiàn),與LT、LT+NS組相比，IL-4的處理能明顯降低IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平（圖3B）。因此通過對供體肝臟持續(xù)灌注IL-4能降低肝移植后肝臟中的炎癥反應。圖3.IL-4減輕大鼠肝移植6小時后的炎癥水平。A：RT-PCR檢測術后6小時肝臟中的炎癥因子的mRNA水平；B：WesternBlot檢測術后6小時肝組織炎癥相關蛋白的水平及相對定量分析。*P<0.05,與Sham比較；#P<0.05，與LT+IL-4比較。Figure3.IL-4couldsuppressinflammationat6hoursafterratlivertransplantation.A:ThemRNAofinflammatorycytokineswasdetectedbyRT-PCR;B:TheproteinsrelatedtoinflammationweretestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.3IL-4能促進肝移植后KCsM2型極化，同時激活KCs中的STAT6-JMJD3信號通路2.3.1IL-4促進肝移植后KCs向M2型極化分離Sham組、LT組、LT+NS、LT+IL-4組的肝移植后6小時的KCs并檢測M2型KCs的比例變化。流式細胞結果顯示：與Sham組相比，LT、LT+NS組中M2型KCs比例增加不明顯，但LT+IL-4組中M2型KCs比例明顯增加（圖4A）。RT-PCR檢測M1型和M2型巨噬細胞標記基因TNF-α、iNOS、Retnla、Arg1的
本文編號：3384440
本文鏈接：http://sikaile.net/shoufeilunwen/mpalunwen/3384440.html
最近更新
教材專著
