本文關鍵詞：敲低PES1基因表達抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231的侵襲和遷移，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:近幾十年來,癌癥在我國的發(fā)病率一直處于上升趨勢,肺癌、乳腺癌、前列腺癌尤為突出。乳腺癌已成為威脅女性健康最重要的疾病之一。隨著科技的進步,對于乳腺癌的篩查及診治有了長足的進步,然而其病死率仍然沒有得到有效控制。影響乳腺癌治療的因素有很多,特別是癌細胞的易轉移性和侵襲能力影響治療效果。通過淋巴管和血管等途徑,腫瘤細胞轉移至腦、肺、肝等組織和器官,產(chǎn)生轉移灶,導致乳腺癌患者死亡。研究發(fā)現(xiàn),上皮-間質(zhì)轉化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)過程在腫瘤細胞的遷移和侵襲中作用重大。EMT是指上皮細胞通過特定程序向間充質(zhì)細胞轉化的生物過程,在胚胎發(fā)育、慢性炎癥、組織重塑、癌轉移中起重要作用。其特點是細胞黏附分子表達減少、細胞角蛋白轉化成波形蛋白(Vimentin)及細胞骨架和形態(tài)上具有間充質(zhì)細胞的特征等。在EMT的過程中,上皮細胞失去細胞極性,損失與基底膜連接等上皮樣表型,獲得了較高的遷移與侵襲等間充質(zhì)細胞表型。PES1基因是在逆轉錄病毒誘發(fā)斑馬魚胚胎發(fā)育缺陷的研究中發(fā)現(xiàn)的。研究表明,PES1在核糖體生成、細胞周期和細胞增殖中有著重要作用。它是一種在乳腺癌細胞中高表達的基因,主要通過調(diào)控類固醇激素信號傳導途徑中的雌激素受體α(ERα)和雌激素受體β(ERβ)發(fā)揮作用,它能夠增強ERα穩(wěn)定性,減少ERβ表達。在ER陽性的乳腺癌中,PES1調(diào)節(jié)雌激素受體α和雌激素受體β之間的平衡,影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展進程。在ER陰性的乳腺癌細胞中,PES1促進細胞的增殖,發(fā)揮一種癌基因的作用。到目前為止,尚不清楚PES1是否影響腫瘤細胞的遷移和侵襲。目的:建立穩(wěn)定表達PES1 shRNA及陰性對照PES1 shRNA con的MDA-MB-231乳腺癌細胞系,研究敲低PES1基因表達對細胞遷移及侵襲的影響。方法:1.設計合成PES1基因的siRNA引物,克隆到pSHI1-H1-Puro載體上;經(jīng)過慢病毒的包裝,測定病毒滴度;感染人乳腺癌MDA-MB-231細胞,建立敲低PES1基因表達的MDA-MB-231穩(wěn)定細胞系;采用RT-qPCR和Western Blot方法檢測PES1在mRNA和蛋白質(zhì)水平的變化;2.利用細胞劃痕實驗觀察細胞遷移能力的變化;3.利用Transwell實驗檢測PES1對細胞侵襲能力的影響。結果和結論:利用敲低PES1基因表達的慢病毒載體,建立了PES1 shRNA的MDA-MB-231的穩(wěn)定克隆細胞系,觀察PES1是否影響細胞的遷移和侵襲能力。研究結果表明,敲低PES1的表達能夠有效抑制MDA-MB-231細胞的遷移和侵襲。
【關鍵詞】：PES1 乳腺癌細胞 遷移 侵襲
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-19
• 1.1 材料12-13
• 1.2 方法13-19
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)13
• 1.2.2 PES1 shRNA慢病毒表達載體構建13-15
• 1.2.3 PES1 shRNA慢病毒表達質(zhì)粒鑒定15-16
• 1.2.4 PES1 shRNA慢病毒表達載體包裝16
• 1.2.5 慢病毒表達載體滴度測定16
• 1.2.6 PES1 shRNA的MDA-MB-231細胞株的構建16-17
• 1.2.7 RT-PCR17-18
• 1.2.8 Western印跡18
• 1.2.9 細胞劃痕實驗18
• 1.2.10 Transwell實驗18-19
• 結果19-23
• 2.1 pSIH1-H1-Puro酶切驗證19
• 2.2 PES1 shRNA慢病毒表達載體測序分析19-20
• 2.3 PES1 shRNA慢病毒表達載體作用效果檢測20
• 2.4 MDA-MB-231敲低PES1穩(wěn)定細胞系的建立20-21
• 2.5 敲低PES1基因抑制MDA-MB-231細胞的遷移21-22
• 2.6 敲低PES1基因抑制MDA-MB-231細胞的侵襲22-23
• 討論23-24
• 結論24-25
• 參考文獻25-27
• 綜述27-33
• 參考文獻31-33
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況33-34
• 致謝34-35

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本文編號：338273