目的:證實(shí)LL-37/CRAMP是否影響NTHi-DNA誘導(dǎo)的IFN-β表達(dá),并了解其對NTHi感染所致COPD模型小鼠肺部炎性損傷效應(yīng)。背景:慢性阻塞性肺疾�。–OPD）是中國繼高血壓和糖尿病之后的第三大常見慢性病。不可分型流感嗜血桿菌（NTHi）感染是導(dǎo)致COPD急性加重（AECOPD）的主要原因之一。對NTHi和宿主相互作用的免疫應(yīng)答進(jìn)行深入的研究,可為預(yù)防及治療NTHi感染誘發(fā)的COPD急性加重提供新的理論基礎(chǔ)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)NTHi-DNA通過促進(jìn)IFN-β分泌而加劇炎癥反應(yīng),不利于COPD的疾病轉(zhuǎn)歸,但是否存在某種分子可以調(diào)控NTHi-DNA介導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng),從而影響COPD疾病感染的轉(zhuǎn)歸,目前尚不清楚。在對臨床樣本檢測中發(fā)現(xiàn),一種抗菌肽,LL-37的表達(dá)水平與COPD疾病進(jìn)程密切相關(guān)。LL-37是人體內(nèi)唯一的cathelicidin家族抗菌肽,在機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)中起著不可或缺的作用,Cathelicidin-related antimicrobial peptide（CRAMP）則是其在小鼠中的唯一同系物。我們在體外實(shí)驗(yàn)的初步研究中也觀察到,當(dāng)RAW264.7細(xì)胞受到... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NTHi-DNA誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中LL-37/CRAMP的表達(dá)增加Figure1-1NTHi-DNAcanpromoteLL-37/CRAMPexpressioninRAW264.7cellsFigure1-1.A.RAW264.7cellsweretransfectedwithNTHi-DNA(1.5μg/ml)orinfectedbyNTHi

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文18圖1-2LL-37/CRAMP促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞對NTHi的殺傷效應(yīng)Figure1-2LL-37/CRAMPcanpromotethekillingeffectofRAW264.7cellsonNTHiFigure1-2.RAW264.7cellswerepre-incubatedwithmediaaloneorLL-37/CRAMP(15μg/ml)overnight,andsubsequentlyinfectedwithNTHiataMOIof100.Bacterialplatecountwasusedtodetectthephagocyticcapacityandintracellularbacterialkillingofmacrophages.p<0.05(*)wasconsideredstatisticallysignificant.3討論NTHi感染是誘發(fā)COPD急性加重的主要原因之一，現(xiàn)有治療方法，如吸入支氣管擴(kuò)張劑和糖皮質(zhì)激素等，往往難以控制病情發(fā)展[3,17]。NTHi入侵宿主后，細(xì)菌內(nèi)化進(jìn)入胞內(nèi)，細(xì)胞受體cGAS識別NTHi-DNA而活化STING信號通路，介導(dǎo)細(xì)胞IFN-β的表達(dá)[8]。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，NTHi-DNA誘導(dǎo)的IFN-β會加重模擬COPD疾病模型小鼠的肺部炎癥反應(yīng)，不利于COPD小鼠對抗細(xì)菌感染的轉(zhuǎn)歸[9]。為此，我們好奇宿主是否存在一種調(diào)控分子或機(jī)制，能夠平衡NTHi-DNA介導(dǎo)的過度炎癥反應(yīng)呢？通過檢測臨床樣本，前人發(fā)現(xiàn)抗菌肽LL-37/CRAMP的表達(dá)水平隨COPD病程進(jìn)展變化，并且與NTHi感染密切相關(guān)[10]。最初，LL-37/CRAMP是作為具有抗菌作用的小分子多肽被發(fā)現(xiàn)的，可保護(hù)宿主免受結(jié)核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌等大多數(shù)微生物的侵襲[15]。LL-37/CRAMP具有α-螺旋結(jié)構(gòu)的陽離子抗菌肽，可以通過電荷吸引作用與細(xì)菌某些帶負(fù)電的細(xì)胞壁成分結(jié)合，然后抗菌肽迅速插入細(xì)菌膜中，引起細(xì)菌溶解和死亡[18]。由此可知，宿主抵御病原微生物侵襲時LL-37/CRAMP可以發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)效應(yīng)，但其對不同微生物感染的作用可能是復(fù)雜和截然不同的。因此，對病原微生物感染時LL-37/CRAMP的作用

2.1 外源性 LL-37/CRAMP 抑制 NTHi-DNA 介導(dǎo)的 IFN-β 表達(dá) 為了研究抗菌肽在 NTHi-DNA 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中的是否影響 IFN-β 表達(dá)，用NTHi 或 NTHi-DNA 刺激 RAW264.7 細(xì)胞，隨后外源給予 LL-37/CRAMP，通過real-time PCR 和 ELISA 檢測了 IFN-β 的表達(dá)水平，其中 poly(dA:dT)組作為陽性對照， CRAMP 組和 Lipo2000 組是試劑對照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與 NC 組、CRAMP組和 Lipo2000 組相比， NTHi 或 NTHi-DNA 的刺激可誘導(dǎo)大量 IFN-β 分泌(圖 2-1 A,B)。外源性 LL-37/CRAMP 給予則可使 NTHi 或 NTHi-DNA 誘導(dǎo)的 IFN-β 表達(dá)顯著下調(diào)(圖 2-1 A,B)。


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