目的:觀察改變NDUFA4表達(dá)對(duì)人結(jié)直腸癌（colorectal carcimona,CRC）細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;探討NDUFA4對(duì)人CRC細(xì)胞生長(zhǎng)影響可能的分子機(jī)制;檢測(cè)NDUFA4在人CRC臨床組織中的表達(dá)并分析其臨床意義。方法:1.利用Real time PCR和Western Blot檢測(cè)不同人結(jié)直腸癌細(xì)胞株中NDUFA4的表達(dá)情況;免疫熒光法驗(yàn)證人結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW620細(xì)胞和SW480細(xì)胞中NDUFA4的表達(dá);設(shè)置p-NDUFA4組、p-Cont組和sh-NDUFA4組、sh-NC組,利用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑,將前期構(gòu)建的NDUFA4過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（p-NDUFA4）、對(duì)照質(zhì)粒（p-Cont）和NDUFA4干擾質(zhì)粒（p-shNDUFA4）、對(duì)照質(zhì)粒（p-shCont）分別體外瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人CRC直腸癌SW620細(xì)胞和SW480細(xì)胞;Real time PCR和Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中NDUFA4的表達(dá)情況;CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性和克隆形成能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化;Western Blot檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白及... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人結(jié)直腸癌細(xì)胞株中NDUFA4的表達(dá)Fig.1-1TheexpressionofNDUFA4indifferenthumanCRCcellswasdetectedbyRealtime

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉士明30細(xì)胞表達(dá)更高水平的NDUFA4（圖1-2，P<0.05），與我們前面實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致�；贜DUFA4在人結(jié)直腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)差異，在后續(xù)研究中，我們分別在SW620細(xì)胞中過(guò)表達(dá)NDUFA4和在SW480細(xì)胞中下調(diào)NDUFA4表達(dá)，觀察改變NDUFA4表達(dá)是否影響人CRC細(xì)胞的生長(zhǎng)。圖1-2NDUFA4在人結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)Fig.1-2TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCcells.ImmunofluorescencestainingwasusedtodetecttheexpressionofNDUFA4proteininhumanCRCcelllineSW620andSW480cells.Magnificance:60×.Therelativequantitivewascalculated.*P<0.05.3.1.3NDUFA4在人CRC直腸癌SW620細(xì)胞和SW480細(xì)胞中的表達(dá)為了觀察改變NDUFA4表達(dá)對(duì)SW620和SW480細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，我們首先通過(guò)RealtimePCR和WesternBlot技術(shù)分別檢測(cè)各組細(xì)胞中NDUFA4的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在SW620細(xì)胞中，與p-Cont對(duì)照組相比，p-NDUFA4過(guò)表達(dá)組中NDUFA4的表達(dá)水平明顯上調(diào)（圖1-3A-C，P<0.05），而在SW480細(xì)胞中，sh-NDUFA4組中NDUFA4的表達(dá)水平明顯低于sh-NC組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1-3D-F，P<0.05）。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉士明31圖1-3NDUFA4在人結(jié)直腸癌SW620和SW480細(xì)胞中的表達(dá)情況Fig.1-3TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCSW620andSW480cells.HumanCRCSW620andSW480cellswereinstantaneouslytransfectedwithp-NDUFA4,p-Cont,sh-NDUFA4,orsh-NC,respectively.ThemRNAandproteinexpressionofNDUFA4weredeterminedbyRealtimePCR(A)(D)andWesternBlot(B)(E)andcalculated(C)(F).*P<0.05,**P<0.01.3.1.4NDUFA4對(duì)SW620和SW480細(xì)胞增殖和克隆形成能力的影響為了觀察改變NDUFA4表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620和SW480細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，我們選用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性，克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了細(xì)胞的克隆形成能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在SW620細(xì)胞中，p-NDUFA4過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的增殖能力和克隆形成能力較p-Cont對(duì)照組明顯增加（圖1-4A-C，P<0.05）；而在SW480細(xì)胞中，與sh-NC對(duì)照組相比，sh-NDUFA4下調(diào)組細(xì)胞的增殖能力和克隆形成能力明顯降低（圖1-4D-F，P<0.05），上述結(jié)果可說(shuō)明NDUFA4基因的過(guò)表達(dá)可以有效促進(jìn)SW620細(xì)胞的體外生長(zhǎng)，而NDUFA4基因的下調(diào)能夠有效抑制SW480細(xì)胞體外生長(zhǎng)。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3315715