白念珠菌是人類(lèi)最常見(jiàn)的條件性真菌病原體,也是人類(lèi)臨床醫(yī)學(xué)中最常見(jiàn)的條件致病真菌。翻轉(zhuǎn)酶又稱(chēng)磷脂轉(zhuǎn)位蛋白,該酶轉(zhuǎn)運(yùn)磷脂酰絲氨酸（PS）和磷脂酰乙醇胺（PE）從細(xì)胞膜系統(tǒng)的一側(cè)轉(zhuǎn)移到另一側(cè),該酶在釀酒酵母膜系統(tǒng)中起著維持磷脂不對(duì)稱(chēng)分布的作用并參與釀酒酵母囊泡介導(dǎo)的運(yùn)輸。Cdc50是翻轉(zhuǎn)酶的一個(gè)非催化亞基,在釀酒酵母中ScCDC50對(duì)其生命活動(dòng)有著重要的影響。本論文通過(guò)生物信息學(xué)方法在白念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定了白念珠菌中含有與ScCDC50具有序列相似性的基因CaCDC50,目前對(duì)CaCDC50的功能尚不清楚。本論文采用同源重組原理進(jìn)行基因敲除,構(gòu)建白念珠菌CaCDC50純合子突變株,通過(guò)藥物壓力表型試驗(yàn)、細(xì)胞壁成分測(cè)定試驗(yàn)、熒光染色試驗(yàn)和毒力試驗(yàn)等方法研究了CaCDC50的缺失對(duì)白念珠菌的抗真菌藥物敏感性、陽(yáng)離子耐受性、細(xì)胞壁完整性、液泡形態(tài)、菌絲發(fā)育和毒力等方面的影響,從而研究CaCDC50的功能。本論文得出以下研究結(jié)果:1、CaCDC50回補(bǔ)了釀酒酵母ScCDC50缺失株的表型;2、缺失CaCDC50后導(dǎo)致白念珠菌對(duì)唑類(lèi)、特比萘芬（Teb）和卡泊芬凈（CSF）等抗真菌藥物及十二烷基磺... 

【文章來(lái)源】：淮北師范大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

白念珠菌的三種細(xì)胞形態(tài)[15]

白念珠菌CaCDC50基因的功能研究41.4白念珠菌細(xì)胞壁1.4.1細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與組分白念珠菌細(xì)胞與環(huán)境或宿主之間首先接觸的結(jié)構(gòu)是細(xì)胞壁，它與病原體的附著密切相關(guān)并攜帶大量重要的抗原因子，對(duì)白念珠菌的致病性發(fā)揮重要的作用[36]。白念珠菌細(xì)胞壁的組分中糖類(lèi)占90%，蛋白占10%，還含有少量的脂類(lèi)[36]。白念珠菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)如圖1-2所示，其中糖類(lèi)主要有三種成分[37]：包括占細(xì)胞壁糖類(lèi)40%的甘露聚糖，占細(xì)胞壁糖類(lèi)60%的β-葡聚糖（包括β-1,3葡聚糖和β-1,6葡聚糖兩種類(lèi)型）和占細(xì)胞壁糖類(lèi)3%的幾丁質(zhì)。細(xì)胞壁是一種具有外層和內(nèi)層的層狀結(jié)構(gòu)。內(nèi)層主要由幾丁質(zhì)和β-葡聚糖聚合物組成，能夠起到細(xì)胞骨架作用。外層由高度糖基化的甘露聚糖蛋白組成，它在細(xì)胞與宿主表面識(shí)別、黏附中起著重要作用[38]。圖1-2白念珠菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)及其在免疫激活中的作用[37]Figure1-2TransmissionelectronmicrographoftheC.albicanscellwallandacartoonshowingthearrangementofthemajorcomponentsandtheroleofthosecomponentsinimmuneactivationandsuppression[37]1.4.2細(xì)胞壁完整性途徑（CWI）準(zhǔn)確快速的感受外界環(huán)境變化和刺激并做出適當(dāng)?shù)膽?yīng)答是生物體活細(xì)胞的基本特征之一。MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境和其他刺激做出適當(dāng)應(yīng)答的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在真核生物細(xì)胞中中高度保守[39]。在白念珠菌細(xì)胞中目前發(fā)現(xiàn)至少存在三個(gè)MAPK級(jí)聯(lián)系統(tǒng)，他們分別由Mkc1、Hog1和Cek1/2三種MAPK蛋白激酶控制，分別調(diào)控細(xì)胞壁完整性（Cellwallintegrity,CWI）、高滲透壓甘油形成（Highosmolarityglycerol,HOG）、菌絲生長(zhǎng)和細(xì)胞交配（mating）等過(guò)程[40]。

白念珠菌CaCDC50基因的功能研究5當(dāng)白念珠菌的細(xì)胞壁受到壓力或產(chǎn)生缺陷時(shí)，就會(huì)激活細(xì)胞的細(xì)胞壁完整性途徑（CWI）[41]。Mkc1和Cek1是細(xì)胞壁完整性途徑下游的兩個(gè)蛋白激酶，其中Mkc1介導(dǎo)細(xì)胞壁完整性途徑在白念珠菌應(yīng)答細(xì)胞壁缺陷和脅迫時(shí)被激活[42-46]，而Cek1參與白念珠菌菌絲侵入性生長(zhǎng)、細(xì)胞壁的重構(gòu)和毒力的維持等方面[47-48]。因此由Mkc1和Cek1介導(dǎo)的細(xì)胞壁完整性途徑（CWI）對(duì)白念珠菌應(yīng)答細(xì)胞壁缺陷和脅迫等方面起重要的作用（圖1-3）[41,49]。圖1-3有絲分裂原蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在細(xì)胞壁壓力應(yīng)答中的作用[49]Figure1-3MAPKpathwaysinC.albicansandtheirrolesincellwallformation[49]1.5CDC50在新生隱球菌和釀酒酵母中的研究翻轉(zhuǎn)酶(P4-ATP酶)又稱(chēng)磷脂轉(zhuǎn)位蛋白，是一類(lèi)大家族的磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)酶(Flippases)。P4-ATP酶參與新生隱球菌的毒力因子輸出過(guò)程已經(jīng)得到了很好的研究[50-52]。該酶轉(zhuǎn)運(yùn)磷脂酰絲氨酸（PS）和磷脂酰乙醇胺（PE）從細(xì)胞膜系統(tǒng)一側(cè)轉(zhuǎn)移到另一側(cè)，與生物膜磷脂不對(duì)稱(chēng)的產(chǎn)生密切相關(guān)[53]。此外，各種模型系統(tǒng)的研究表明P4-ATP酶在生物膜形成過(guò)程中起著多種重要的作用，除了它們?cè)诮⒑途S持質(zhì)膜不對(duì)稱(chēng)方面的作用外，P4-ATP酶還與囊泡介導(dǎo)的蛋白在外細(xì)胞和內(nèi)源性途徑中的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)[54]。Cdc50是翻轉(zhuǎn)酶的一個(gè)非催化亞基，已有研究表明該酶在新生隱球菌膜系統(tǒng)中維持磷脂不對(duì)稱(chēng)分布，并在囊泡介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]白念珠菌質(zhì)膜蛋白CaRch1對(duì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)和耐藥調(diào)控功能的機(jī)理研究[D]. 徐大勇.江南大學(xué) 2016



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