血管內(nèi)皮細(xì)胞受損與許多心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),已成為在當(dāng)今生命科學(xué)、藥學(xué)領(lǐng)域中重要的研究對象。心血管疾�。–ardiovascular disease,CVD）是世界上導(dǎo)致死亡的主要原因之一,通常由內(nèi)皮功能障礙引發(fā);缺乏足夠數(shù)量功能正常的內(nèi)皮細(xì)胞（Endothelial cells,ECs）是阻礙了通過細(xì)胞替代治療心血管疾病的原因之一。人類多能干細(xì)胞包括胚胎干細(xì)胞（Human embryonic stem cells,hESCs）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）可提供體外生產(chǎn)大量功能內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)會,可用于移植,藥物篩選或研究。然而,目前hESCs衍生ECs的分化方案多種多樣,對其分化后內(nèi)皮細(xì)胞類型特性的研究尚不完善,尤其是不同的分化方法以及基礎(chǔ)培養(yǎng)液對于胚胎干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的影響以及分化后細(xì)胞特性的區(qū)別尚未充分研究。為此本研究首先通過分離組織來源的人臍帶和臍血的內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞,建立培養(yǎng)鑒定體系,然后通過建立多能干細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮祖細(xì)胞的分化方案,對比不同基礎(chǔ)分化培養(yǎng)液和及不同分化方法探究不... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HUAEC和HUVEC的細(xì)胞增殖活力

胚胎干細(xì)胞向內(nèi)皮（祖）細(xì)胞分化與組織來源內(nèi)皮細(xì)胞的比較82.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1HUAEC和HUVEC的細(xì)胞形態(tài)和增殖活力倒置顯微鏡下觀察HUAEC和HUVEC的形態(tài)特征，發(fā)現(xiàn)經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化法分離的原代細(xì)胞，2-3天內(nèi)皮細(xì)胞就可以貼壁，隨后細(xì)胞膜擴(kuò)張，細(xì)胞增殖速度加快，單個(gè)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，由原來的圓形變得不規(guī)則，呈多邊形或紡錘形，聚集的細(xì)胞增殖向四周擴(kuò)展形成中心部位排列密集，周圍游離生長的的細(xì)胞集落，呈漩渦狀或紋理狀（圖2.1）在培養(yǎng)瓶底部均勻分布。傳代培養(yǎng)后內(nèi)皮細(xì)胞的活力明顯變強(qiáng)，增殖速度加快，傳至10代以后內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)有所變化，增殖速度明顯減慢（圖2.2）。原代分離的人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞與靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)并無明顯區(qū)別；剛分離的細(xì)胞活力旺盛，經(jīng)過傳代后活力明顯下降，HUAEC的增殖活力略高于HUVEC（P<0.05）。圖2.1HUAEC和HUVEC的P1、P3、P5、P7、P9代細(xì)胞形態(tài)。Figure.1HUAECandHUVECP1,P3,P5,P7,P9cellmorphology.圖2.2HUAEC和HUVEC的細(xì)胞增殖活力。

胚胎干細(xì)胞向內(nèi)皮（祖）細(xì)胞分化與組織來源內(nèi)皮細(xì)胞的比較10后降低的趨勢，基本不表達(dá)CD309，但大體上兩者不具有差異（圖2.4）圖2.4流式細(xì)胞術(shù)分析HUAEC和HUVEC表面標(biāo)記的表達(dá)。Figure2.4AnalysisofHUAECandHUVECSurfaceMarkersbyFlowCytometry..2.3.4HUAEC和HUVEC的特異基因表達(dá)通過qPCR檢測兩者的特異性基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，HUVEC（P2）高表達(dá)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞特異性基因COUP-TFⅡ和EPHB4；HUAEC（P2）高表達(dá)動脈特異性基因EFNB2、CXCR4、DLL4和NRP1（圖2.5）。但是，HUAEC和HUVEC在相同的體外培養(yǎng)條件下，經(jīng)過傳代培養(yǎng)，從P2到P10，HUVEC的特異性基因COUP-TFⅡ和EPHB4相對表達(dá)量一直遠(yuǎn)高于HUAEC，保持其顯著性差異；而HUAEC的特異性基因CXCR4、DLL4、NRP1和EFNB2的相對表達(dá)量顯著下調(diào)，喪失其動脈特異性差異（P6代）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]New categorization of human vascular endothelial cells by pro-vs anti-proliferative phenotypes[J]. Miwako Nishio,Masako Nakahara,Chikako Sato,Koichi Saeki,Hidenori Akutsu,Akihiro Umezawa,Kazuyuki Tobe,Kazuki Yasuda,Akira Yuo,Kumiko Saeki.  World Journal of Translational Medicine. 2015(03)
[2]一種高效分離和培養(yǎng)人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞方法的建立[J]. 霍迎慶,王雷,賀淑君,韓曉帆,蔣蓓蓓,羅金才.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(07)



本文編號：3225907