肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是常見的高發(fā)惡性腫瘤。因此,迫切需要探索治療肝癌的新型藥物。植物已被用作抗癌藥物資源,并且許多來自植物的抗癌藥物已經(jīng)被報(bào)道。栝樓（Trichosanthes kirilowii）是廣泛分布于我國各地的一種草本植物。栝樓具有多種生物活性成分,例如萜類化合物,固醇,類黃酮,含氮化合物和木材脂蛋白。大量研究表明,這些化合物具有多種藥理活性,包括抗心肌缺血,抗缺氧,抗血小板聚集,抗炎,抗氧化作用和細(xì)胞毒性等。TKP是從栝樓果實(shí)中提取出的一種低毒抗腫瘤活性蛋白,它是一種絲氨酸蛋白酶。研究表明,TKP有顯著的抗大腸癌活性,并且TKP可以通過PI3K/AKT介導(dǎo)的線粒體途徑誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞凋亡。但是TKP對(duì)肝癌的影響尚未有研究。本研究旨在研究TKP對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響,并進(jìn)一步闡明其分子機(jī)制。主要研究內(nèi)容包括以下幾方面:第一部分:TKP對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和有氧糖酵解的影響。分別用濃度為0、2.5、5、10、20和40μg/mL的TKP處理肝癌細(xì)胞Bel-7402,HepG2和肝正常細(xì)胞HL770224 h,之后用MTT法檢測肝癌細(xì)胞存活率。M... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肝癌
    1.2 栝樓簡介
        1.2.1 栝樓
        1.2.2 栝樓中的活性物質(zhì)
        1.2.3 栝樓的抗腫瘤活性
        1.2.4 TKP與腫瘤
    1.3 有氧糖酵解
        1.3.1 有氧糖酵解簡介
        1.3.2 有氧糖酵解與肝癌
    1.4 PKM2 概述
        1.4.1 PKM2
        1.4.2 調(diào)控PKM2 的因子
    1.5 本課題研究目的及意義
第二章 TKP抑制肝癌細(xì)胞增殖和有氧糖酵解
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇及凍存
        2.2.3 TKP的提取及純化
        2.2.4 MTT法檢測細(xì)胞存活
        2.2.5細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 葡萄糖和乳酸檢測
        2.2.7 總RNA提取
        2.2.8 熒光定量PCR
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 細(xì)胞存活
        2.3.2 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 細(xì)胞克隆形成
        2.3.3 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 細(xì)胞有氧糖酵解
        2.3.4 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 細(xì)胞糖酵解過程中關(guān)鍵因子的表達(dá)
    2.4 討論
第三章 TKP通過調(diào)節(jié)PKM2 抑制肝癌細(xì)胞有氧糖酵解
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株系
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及抗體
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 肝癌細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 肝癌細(xì)胞凍存及復(fù)蘇
        3.2.3 TKP的提取及純化
        3.2.4 細(xì)胞內(nèi)蛋白提取
        3.2.5 Western印跡
        3.2.6 丙酮酸激酶活性測定
        3.2.7 總RNA提取
        3.2.8 熒光定量PCR
        3.2.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.10 葡萄糖和乳酸含量檢測
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 TKP抑制PKM2 的表達(dá)和核易位
        3.3.2 TKP抑制PKM2 丙酮酸激酶活性
        3.3.3 過表達(dá)PKM2 逆轉(zhuǎn)TKP對(duì)肝癌細(xì)胞有氧糖酵解的抑制作用
    3.4 討論
第四章 TKP通過β-catenin/c-Myc/hnRNPA1 途徑調(diào)節(jié)PKM2、肝癌細(xì)胞增殖和有氧糖酵解
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞株系
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及抗體
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 肝癌細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 肝癌細(xì)胞復(fù)蘇及凍存
        4.2.3 TKP的提取及純化
        4.2.4 總RNA提取
        4.2.5 熒光定量PCR
        4.2.6 細(xì)胞蛋白提取
        4.2.7 Western印跡
        4.2.8 葡萄糖和乳酸含量檢測
        4.2.9 MTT法檢測細(xì)胞存活
        4.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 TKP抑制肝癌細(xì)胞中hnRNPA1和c-Myc的表達(dá)
        4.3.2 TKP通過β-catenin/c-Myc/hnRNPA1 途徑調(diào)節(jié)PKM2
        4.3.3 TKP通過β-catenin/c-Myc/hnRNPA1 途徑抑制肝癌細(xì)胞有氧糖酵解和細(xì)胞增殖
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1 主要試劑配方
附錄2 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備
附錄3 英文縮略語表
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡況及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Targeting Wnt/β-catenin pathway in hepatocellular carcinoma treatment[J]. Valery Vilchez,Lilia Turcios,Francesc Marti,Roberto Gedaly.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)
[2]Hepatocellular carcinoma: From diagnosis to treatment[J]. Abhijeet Waghray,Arvind R Murali,KV Narayanan Menon.  World Journal of Hepatology. 2015(08)



本文編號(hào)：3205805