目的:探討視網(wǎng)膜母細胞瘤基因（Rb）對人骨肉瘤增殖、遷移和侵襲作用的影響,并從分子層面分析Rb分子對人骨肉瘤生物學性狀的影響。方法:（1）檢測Rb在正常成骨細胞（hFOB1.19）和骨肉瘤細胞系（U2-OS、Saos-2及MG-63）中RNA含量,同時檢測Rb在正常骨組織和人骨肉瘤組織中表達量,比較其表達量差異。（2）選取Saos-2細胞,利用慢病毒構(gòu)建Rb高表達和低表達模型,對照組轉(zhuǎn)染空載體。檢測高表達模型和低表達模型中Rb對骨肉瘤細胞增殖（CCK-8實驗）、遷移（劃痕實驗）和侵襲（Transwell實驗、qRT-PCR、Western-bolt）等生物學特性的影響。（3）慢病毒轉(zhuǎn)染Saos-2骨肉瘤細胞后構(gòu)建骨肉瘤裸鼠移植瘤動物模型,2周后開始測量和比較各組瘤體的體積和重量,qRT-PCR檢測裸鼠瘤體內(nèi)Rb和細胞絨毛蛋白基因（Ezrin）的表達量。結(jié)果:（1）qRT-PCR實驗結(jié)果顯示,Rb在人骨肉瘤組織和骨肉瘤細胞系中的表達量均較正常骨組織（P<0.001）和成骨細胞（P<0.001）中顯著降低。（2）利用慢病毒載體來轉(zhuǎn)染Saos-2骨肉瘤細胞,轉(zhuǎn)染效率可達90%以上... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

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前言
第一部分 Rb在骨肉瘤細胞系和骨肉瘤臨床標本中的表達比較
    1 材料與方法
        1.1 組織樣本和細胞系來源
        1.2 主要耗材儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 總RNA的提取
        1.5 總RNA逆轉(zhuǎn)錄成c DNA
        1.6 cDNA進行qRT-PCR
    2 結(jié)果
        2.1 Rb在骨肉瘤各細胞系中低表達
        2.2 Rb在骨肉瘤組織中低表達
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 Rb在體外對骨肉瘤細胞增殖、遷移及侵襲作用的影響
    1 材料與方法
        1.1 主要耗材儀器
        1.2 主要試劑
        1.3 細胞培養(yǎng)與慢病毒轉(zhuǎn)染
        1.4 Rb、Ezrin基因的qPCR反應
        1.5 細胞增殖實驗
        1.6 細胞遷移實驗
        1.7 細胞侵襲實驗
        1.8 Western-Blot凝膠電泳
    2 結(jié)果
        2.1 成功構(gòu)建Rb低表達模型和Rb過表達模型
        2.2 Rb過表達可以抑制骨肉瘤細胞的增殖
        2.3 Rb過表達可以抑制骨肉瘤細胞的遷移
        2.4 Rb過表達可以抑制骨肉瘤細胞的侵襲
        2.5 Rb過表達可以抑制Ezrin的 mRNA表達
        2.6 Rb過表達可以抑制Ezrin的蛋白表達
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 Rb在體內(nèi)對骨肉瘤增殖及轉(zhuǎn)移的影響
    1 材料與方法
        1.1 主要耗材儀器
        1.2 主要試劑
        1.3 建立異種移植瘤模型
        1.4 qPCR檢測瘤體內(nèi)Rb、Ezrin的 mRNA含量
    2 結(jié)果
        2.1 Rb在體抑制裸鼠瘤體生長
        2.2 Rb過表達可以抑制Ezrin的 mRNA表達
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果
個人簡歷



本文編號：3193252