目的:體外培養(yǎng)小鼠MIN-6細胞,進行分組干預,明確血管緊張素（1-7）對高糖應力下胰島β細胞去分化的影響,為糖尿病治療提供新思路。方法:在紫外線消毒30分鐘的超凈工作臺,將MIN-6小鼠胰島細胞吸入至提前配置好的完全培養(yǎng)基3ml（10%胎牛血清、1%青鏈霉素雙抗溶液、89%RPMI-1640基礎培養(yǎng)基混勻配置）,吹打均勻后放于25T培養(yǎng)瓶,最后放置37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中孵化,24小時換液,顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),細胞貼壁均勻生長至70%-80%可進行傳代,傳至第5代時進行實驗具體操作。將懸浮的MIN-6細胞均勻分布于6孔板中,分別標記A、B、C、D組,分別為實驗對照組、高糖組、高糖+Ang-（1-7）組、高糖+Ang-（1-7）+Mas受體阻斷劑A779組,共同培養(yǎng)24小時,重復3次上述操作。用細胞免疫熒光法檢測各組MIN-6成熟β細胞表面標志物PDX-1蛋白以及去分化后祖細胞表面標志物Oct4、Nanog蛋白表達。結(jié)果:1.細胞形態(tài):顯微鏡下觀察,正常對照組中的MIN-6細胞,呈瓦片狀,貼壁均勻生長;高糖組可見懸浮細胞,貼壁細胞分布不均勻,且形態(tài)不一... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
常用縮寫詞中英文對照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實驗細胞
    1.2 實驗主要試劑
    1.3 實驗主要儀器
    1.4 實驗主要試劑配制方法
2 研究方法
    2.1 MIN-6 小鼠胰島細胞培養(yǎng)
        2.1.1 細胞復蘇
        2.1.2 細胞傳代
        2.1.3 細胞凍存
    2.2 實驗分組
    2.3 細胞免疫熒光
    2.4 統(tǒng)計學分析
3 結(jié)果
    3.1 顯微鏡下觀察各組MIN-6 細胞生長狀況
    3.2 細胞免疫熒光法檢測各組MIN-6 成熟細胞表面標志物PDX-1 以及去分化后祖細胞表面標志物Oct4、Nanog3 蛋白表達
    3.3 小鼠 MIN-6 內(nèi)分泌祖細胞表型標志物 Oct4、Nango 免疫熒光結(jié)
    3.4 MIN-6 細胞表型標志物 PDX-1、Oct4、Nango 相對表達水平
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2型糖尿病的胰島β細胞衰竭新機制——胰島β細胞去分化[J]. 譚明紅,魏平.  中國糖尿病雜志. 2017(01)
[2]血管緊張素1-7對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響及機制[J]. 何軍華,劉航,王麗,吳慧璐,丹妮,郭紅,李興.  中國藥物與臨床. 2017(01)
[3]高糖通過下調(diào)FoxO1磷酸化誘導β細胞去分化[J]. 劉嬋,鄭曉雅,夏佳佳,任偉,李林蔓,劉蘭.  中國生物化學與分子生物學報. 2016(01)



本文編號：3189368