目的 研究非瑟酮對高糖高脂誘導(dǎo)小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞（Mouse brain microvascular endothelial cells,BEND3 cells）損傷的影響及機制。方法 1.建立高糖高脂誘導(dǎo)小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞模型。實驗分組為:正常對照組、高糖高脂模型組（25 mmol·L-1葡萄糖+200 μmol·L-1棕櫚酸）、非瑟酮治療組（非瑟酮 0.3 μg·mL-1、1.5 μg·mL-1、7.5 μg·mL-1、37.5 μg·mL-1）、（非瑟酮1.5 μg·mL-1、3 μg·mL-1、6 μg·mL-1、12 μg·mL-1）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）組（20 ng·mL-1）。CCK-8 法檢測各組細胞存活率以篩選最佳給藥劑量;LDH釋放檢測法評價非瑟酮細胞毒性;2.免疫蛋白印跡法檢測各組細胞凋亡基因蛋白B淋巴細胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）,BCL2-Associated X 的蛋白質(zhì)（BCL2-Associated X Protein,Bax）表達情況;... 

【文章來源】：山西中醫(yī)藥大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

非瑟酮對高糖高脂誘導(dǎo)的BEND3細胞存活率及細胞毒性的檢測Figure1.EffectsoffisetinonsurvivalrateandcytotoxicityofBEND3cellsinducedbyhighglucoseandpalmiticacid注:與正常對照組相比，高糖高脂模型組***P<0.001；與高糖高脂模型組相比，非瑟酮組#P

非瑟酮對高糖高脂誘導(dǎo)的小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞損傷模型的影響和機制研究13BEND3細胞形態(tài)：正常BEND3細胞貼壁生長，上皮樣細胞，呈長梭形、多角形；高糖高脂干預(yù)后，可觀察到細胞數(shù)量減少，體積變小，缺少均一性且失去其原有形態(tài)，細胞大量死亡；非瑟酮和VEGF組作用于高糖高脂干預(yù)后的BEND3細胞，與單純高糖高脂干預(yù)后的細胞相比，細胞數(shù)量增多，細胞總體形態(tài)雖仍有圓形但相對較規(guī)整，細胞形態(tài)大多呈長梭形。如圖2所示。圖2鏡下觀察細胞形態(tài)Fig.2Cellmorphologywasobservedundermicroscope3.2非瑟酮改善高糖高脂誘導(dǎo)BEND3細胞的凋亡為進一步檢測高糖高脂干預(yù)后是否引起小鼠腦血管內(nèi)皮細胞凋亡，采用WesternBloting檢測典型凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白表達。結(jié)果顯示：與Control相比，Model組Bcl-2蛋白表達降低，Bax蛋白表達升高，Bcl-2/Bax比值降低(P<0.001)，與Model組相比，非瑟酮治療組Bcl-2蛋白表達升高，Bax蛋白表達降低，Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。如圖3所示。圖3：非瑟酮對高糖高脂誘導(dǎo)BEND3細胞凋亡基因Bax,Bcl-2蛋白表達影響Fig.3ExpressionofBax,Bcl-2inBEND3cellsinjurymodelinducedbyhighglucoseandpalmiticacidinfisetin注：Control：正常對照組，Model：高糖高脂模型組(25mmol·L-1HG+200μmol·L-1PA)。與Control組相比，Model組***P<0.001；與Model組相比，F(xiàn)isetin組#P<0.05。Fig.3ExpressionofBcl-2/BaxintheBEND3cellinjurymodelinducedbyhighglucoseandpalmiticacidwasdetectedbyWesternblot.Resultsrepresentthemean±SDofthreeindependent

非瑟酮對高糖高脂誘導(dǎo)的小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞損傷模型的影響和機制研究13BEND3細胞形態(tài)：正常BEND3細胞貼壁生長，上皮樣細胞，呈長梭形、多角形；高糖高脂干預(yù)后，可觀察到細胞數(shù)量減少，體積變小，缺少均一性且失去其原有形態(tài)，細胞大量死亡；非瑟酮和VEGF組作用于高糖高脂干預(yù)后的BEND3細胞，與單純高糖高脂干預(yù)后的細胞相比，細胞數(shù)量增多，細胞總體形態(tài)雖仍有圓形但相對較規(guī)整，細胞形態(tài)大多呈長梭形。如圖2所示。圖2鏡下觀察細胞形態(tài)Fig.2Cellmorphologywasobservedundermicroscope3.2非瑟酮改善高糖高脂誘導(dǎo)BEND3細胞的凋亡為進一步檢測高糖高脂干預(yù)后是否引起小鼠腦血管內(nèi)皮細胞凋亡，采用WesternBloting檢測典型凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白表達。結(jié)果顯示：與Control相比，Model組Bcl-2蛋白表達降低，Bax蛋白表達升高，Bcl-2/Bax比值降低(P<0.001)，與Model組相比，非瑟酮治療組Bcl-2蛋白表達升高，Bax蛋白表達降低，Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。如圖3所示。圖3：非瑟酮對高糖高脂誘導(dǎo)BEND3細胞凋亡基因Bax,Bcl-2蛋白表達影響Fig.3ExpressionofBax,Bcl-2inBEND3cellsinjurymodelinducedbyhighglucoseandpalmiticacidinfisetin注：Control：正常對照組，Model：高糖高脂模型組(25mmol·L-1HG+200μmol·L-1PA)。與Control組相比，Model組***P<0.001；與Model組相比，F(xiàn)isetin組#P<0.05。Fig.3ExpressionofBcl-2/BaxintheBEND3cellinjurymodelinducedbyhighglucoseandpalmiticacidwasdetectedbyWesternblot.Resultsrepresentthemean±SDofthreeindependent

【參考文獻】：
期刊論文
[1]胰島素對代謝的中樞調(diào)控作用[J]. 張健維,王俊博,王夢遠,劉佳瑞,劉訥鷗,鄭瑞茂.  生理科學(xué)進展. 2018(06)
[2]Keap1-Nrf2-ARE信號通路與2型糖尿病氧化應(yīng)激相關(guān)性研究進展[J]. 宋媛,李虹,閆海震,趙倉煥,歐仕益.  中國老年學(xué)雜志. 2015(10)
[3]Oxidative stress,insulin resistance,dyslipidemia and type 2 diabetes mellitus[J]. Surapon Tangvarasittichai.  World Journal of Diabetes. 2015(03)
[4]Type 2 diabetes mellitus and Alzheimer’s disease[J]. Mario Barbagallo,Ligia J Dominguez.  World Journal of Diabetes. 2014(06)
[5]鐵皮石斛多糖對高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞Bax、Bcl-2表達的影響[J]. 張貝貝,劉文洪,李俊峰,葉志青.  中國藥理學(xué)通報. 2015(01)
[6]胰高血糖素樣肽-1受體與緊密連接相關(guān)蛋白5在糖尿病大鼠腦微血管內(nèi)皮的表達變化[J]. 李蕓,柳彌,吳碧華,王冠.  中華腦科疾病與康復(fù)雜志(電子版). 2014(03)
[7]高糖對小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞釋放高遷移率蛋白-1的影響[J]. 王雯,汪青松,王軍.  中國臨床保健雜志. 2011(06)
[8]2型糖尿病大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9及其抑制因子-1的表達變化[J]. 穆維新,沈亞欣,崔士杰,王綿.  河北醫(yī)藥. 2010(09)
[9]糖尿病血管并發(fā)癥線粒體氧化損傷機制及藥物治療進展[J]. 時樂,黎蕾.  中華老年醫(yī)學(xué)雜志. 2006(03)
[10]葡萄糖誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細胞凋亡及其對bax和bcl-2表達的影響[J]. 黃雌友,文格波,曹仁賢,劉江華,歐陽貴.  中國糖尿病雜志. 2003(01)

碩士論文
[1]補腎活血方對糖尿病腦微血管病變細胞模型的改善作用和機制研究[D]. 趙佳奇.山西中醫(yī)藥大學(xué) 2019



本文編號：3105377