發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 02:00

　　目的:腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是臨床肺腺癌治療的難點(diǎn),其抑制對(duì)改善惡性肺腫瘤預(yù)后不良至關(guān)重要。腫瘤的運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞力學(xué)活動(dòng)密切相關(guān),而其如何調(diào)控肺腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移目前并不清楚。方法:本研究采用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了肺腺癌細(xì)胞A549侵襲轉(zhuǎn)移模型;依據(jù)FRET原理,構(gòu)建了從細(xì)胞骨架連接至細(xì)胞膜依次為β-actin、β-catenin、N-cadherin的三種熒光張力探針,利用這三種探針檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)張力傳導(dǎo)變化;同時(shí),我們對(duì)β-catenin探針和N-cadherin探針實(shí)施了點(diǎn)突變或結(jié)構(gòu)域截短處理,得到β-catenin（Y489 mutant）和N-cadherin（△β-catenin）張力探針,用來(lái)揭示細(xì)胞內(nèi)張力來(lái)源及其傳遞;并采用細(xì)胞骨架穩(wěn)定劑和過(guò)表達(dá)點(diǎn)突變探針和結(jié)構(gòu)域截短探針研究了細(xì)胞結(jié)構(gòu)張力與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系;通過(guò)轉(zhuǎn)染lifeact和免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀(guān)察:微絲骨架解聚變化對(duì)上述張力傳遞的影響;采用冰點(diǎn)滲透壓儀量化細(xì)胞質(zhì)滲透壓的變化;結(jié)合鈣離子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)、MQAE實(shí)驗(yàn)和納米顆粒數(shù)量分析儀評(píng)估:細(xì)胞內(nèi)液鈣、氯離子濃度和蛋白顆粒數(shù)目及分布變化。結(jié)果:EGF刺激增強(qiáng)了 A549... 

【文章來(lái)源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?：?Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｐｃａｔｅｎｉｎ張力探針的構(gòu)建及有效性、運(yùn)動(dòng)性檢狽Ｉ］??Ａ張力傳感器簡(jiǎn)要機(jī)制示意圖

?南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文???Ａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ?Ｂ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ??？?＿霉ｇ讓??＿＿?、私魏??Ｃ?？?ｉ〇〇１?＾－１?Ｄ?一?■（：〇＿??ｄ?＿?ＥＧＦ??｜?８〇＿?Ｉ?１５°－??ｌ?６０－?＇Ｓ??Ｓ?ｓ?１０°－??Ｉ?４０—?１?＿?■??ｒ：ｌ＾＿?：：謾丄??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ?Ｉｎｖａｓｉｏｎ?Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ??Ｐ－ａｃｔｉｎ??ｃ〇ｎｕ〇１?＂?ｉ；；??ｅｇｆ?＾?＾?ｍｍ?Ａ１?＼?：：７＾?．?？二??ｍｉｎ??ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??Ｐ－ｃａｔａｎｉｎ??—?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?＂?一＿＊＾￣？?一??ｅｇｆ?ｈ?一，＿．—＾??ｎ＊＃ｎ??Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ??—１?丨：＾：??１，ａ＾－—???ＥＧＦ?ｉ。廠(chǎng)，：：??ｎｉｎ??圖２：?ＥＧＦ誘導(dǎo)Ａ５４９細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及Ｐ－ａｃｔｉｎ、Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ分子張力均增強(qiáng)??Ａ?Ａ５４９細(xì)胞的劃痕實(shí)驗(yàn)。左邊為對(duì)照組的〇丨１及２４ｈ后的劃痕恢復(fù)情況，石邊為ＥＧＦ誘導(dǎo)的Ａ５４９細(xì)??胞在Ｏｈ和２４ｈ的劃痕情況。比例尺為３００｜ｉｍ。??Ｂ?Ａ５４９細(xì)胞的ｔｒａｎｓｗｅｌｌ攜彳（實(shí)驗(yàn)。左邊為對(duì)照組在２４ｈ后分別在鋪基質(zhì)膠與未鋪基質(zhì)膠時(shí)透過(guò)８｜ａｍ??聚碳酸酯微孔的細(xì)胞數(shù)Ｓ，右邊為ＥＧＦ作用組／Ｅ?２４ｈ后分別在鋪基質(zhì)膠與未鋪基質(zhì)膠時(shí)透過(guò)ｈｉｍ聚碳??１９??

?南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文???ＤＡＰＩ?Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ?Ｍｅｒｇｅ??Ｃｏｎｔｒｏｌ??—丨?Ｐｗ＾??——ｉｌ?￣?＿?一?—?，?－一?一．?？？?ｒ－＇－。，＇ｊ?ｃ?１?ｊ?＞?＜??■葡??Ｂ?Ｃｏｎｔｒｏｌ??ＥＧＦ??＾?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ?ＥＧＦ＋ＪＫ?ＥＧＦ＋Ｔａｘｏｌ?ＥＧＦ＋ＪＫ＋Ｔａｘｏｌ??＿＿＿＿＿??圖５：?ＥＧＦ誘導(dǎo)Ａ５４９細(xì)胞Ｆ－ａｃｔｉｎ解聚增強(qiáng)，并向膜邊緣移動(dòng)??Ａ鬼筆環(huán)肽特異性染色Ｆ－ａｃｔｉｎ。藍(lán)色表示細(xì)胞核，綠色表示Ｆ－ａｃｔｉｎ。右邊為對(duì)應(yīng)左圖的熒光亮度折線(xiàn)??圖，橫坐標(biāo)為左圖ｍｅｒｇｅ中往箭頭方向紅線(xiàn)走向，縱坐標(biāo)為熒光強(qiáng)度值。比例尺為２５剛。??Ｂ?Ａ５４９細(xì)胞轉(zhuǎn)染ｌｉｆｅａｃｔ熒光染料２４ｈ后，ＥＧＦ及對(duì)照組作用細(xì)胞１５ｍｉｎ內(nèi)Ｆ－ａｃｔｉｎ在細(xì)胞中分布情況。??比例尺力１５｜ａｍ。??Ｃ四組藥物作用細(xì)胞１５ｍｍ及對(duì)照組的免疫熒光實(shí)驗(yàn)。藍(lán)色為細(xì)胞核，綠色表示Ｆ－ａｃｔｉｎ，白色實(shí)心三??２９??


本文編號(hào)：2902411