本文關鍵詞：文蛤多糖的提取純化、結構分析及抗氧化、免疫活性初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus.)主產于我國東部沿海,資源豐富,具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值。自古以來文蛤即為藥食同源的動物之 ,傳統(tǒng)醫(yī)學證明文蛤浸提物具有治療發(fā)炎、濕熱、瘡、保肝和防癌的功效。近代研究表明,文蛤所含有的蛋白、多糖、脂肪酸等是其生理、藥理活性的物質基礎。多糖類物質是文蛤中的一類主要活性物質,其在抗氧化、提高免疫及抗腫瘤等方面均具有良好的生物活性。盡管如此,目前對于文蛤多糖的研究仍不夠系統(tǒng)和深入,關于文蛤多糖的結構以及活性等方面的信息仍然匱乏。為了進一步了解文蛤中多糖成分的理化性質和生物活性,本課題對文蛤多糖進行了提取、分離和結構分析,并初步開展了抗氧化及免疫調節(jié)活性研究。本課題依次采用酶法提取、乙醇沉淀、Sevage法除蛋白、乙醇再沉淀的方法提取獲得了文蛤多糖,提取得率(以文蛤干重計)為6.0-10.0%。以文蛤多糖得率為指標,選取加酶量、加酶種類、提取時間和料水比四個因素進行多糖提取的單因素條件優(yōu)化。優(yōu)化后的提取工藝為：胰蛋白酶用量2.0%(以底物計),料水比1：10,提取時間4 h。采用Sevage法脫蛋白得到蛋白含量小于5.0%的文蛤粗多糖,進一步用DEAE-52纖維素層析柱和Superdex-200凝膠層析柱進行分離純化后得到兩個多糖組分MMPX-1和MMPX-2。經Superdex 200凝膠色譜柱法對MMPX-1和MMPX-2進行純度鑒定,證明二者都是均一的多糖組分。進一步采用紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)、核磁共振(NMR)、氣相色譜(GC)和高碘酸氧化、Simth降解、甲基化反應等方法對上述兩個文蛤多糖組分進行結構表征及鑒定。分析結果表明：MMPX-1的平均分子量為1.04×106Da,其單糖組成包括甘露糖、葡萄糖和半乳糖,相應的摩爾百分比為21.1%,29.9%,49.0%；主鏈為(1→4)-β-半乳糖,(1→4)-β-葡萄糖,(1→4)-β-甘露糖,支鏈為連接在主鏈半乳糖糖基C-6位置上的(1→3)-α-葡萄糖和α構型末端葡萄糖。MMPX-2的平均分子量為5.0×105Da,主要由葡萄糖和半乳糖組成,其摩爾百分比分別為87.7%和12.3%,主鏈為(1→4)-α-葡萄糖,支鏈為連接在主鏈葡萄糖C-6位置上的(1→3)-β-半乳糖和β構型末端半乳糖。進一步對純化得到的兩個多糖組分進行體外抗氧化及細胞免疫活性的評價。以抗壞血酸為陽性對照,對文蛤多糖MMPX-1和MMPX-2進行體外清除DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥基自由基的能力以及總還原能力的表征等實驗。實驗結果表明,兩個多糖組分均具有一定的抗氧化活性,MMPX-2的抗氧化活性略高于MMPX-1。以脂多糖LPS為陽性對照,對文蛤多糖MMPX-1和MMPX-2誘導小鼠單核巨噬細胞RAW264.7產生細胞因子(NO、TNF-α、IL-6、IL-1β)的能力進行評價,結果表明,MMPX-2具有良好的激活小鼠巨噬細胞產生細胞因子的作用,其免疫活性值得進一步研究。
【關鍵詞】：文蛤 多糖 結構鑒定 抗氧化 免疫調節(jié)
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R284
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 緒論7-13
• 1.1 文獻綜述7-11
• 1.1.1 文蛤研究概況7-8
• 1.1.2 貝源多糖的研究現(xiàn)狀8-11
• 1.2 本課題的目的意義及主要內容11-13
• 1.2.1 研究目的和意義11-12
• 1.2.2 主要研究內容12-13
• 第二章 文蛤多糖提取條件優(yōu)化及分離純化13-22
• 2.1 引言13
• 2.2 材料與方法13-16
• 2.2.1 實驗材料13
• 2.2.2 主要儀器設備與試劑13-14
• 2.2.3 實驗方法14-16
• 2.3 結果與分析16-21
• 2.3.1 葡萄糖標準曲線的繪制16
• 2.3.2 提取工藝的優(yōu)化結果16-18
• 2.3.3 Sevage法脫除蛋白18-19
• 2.3.4 DEAE-52纖維素柱初步分離純化19
• 2.3.5 Superdex 200進一步分離純化19-20
• 2.3.6 文蛤多糖純度鑒定結果20-21
• 2.4 本章小結21-22
• 第三章 文蛤多糖MMPX-1與MMPX-2的結構鑒定22-35
• 3.1 引言22
• 3.2 材料與方法22-25
• 3.2.1 實驗試劑22-23
• 3.2.2 儀器與設備23
• 3.2.3 實驗方法23-25
• 3.3 結果與分析25-34
• 3.3.1 文蛤多糖分子量的測定結果25
• 3.3.2 文蛤多糖的單糖組成分析25-26
• 3.3.3 文蛤多糖的紅外光譜分析26-28
• 3.3.4 文蛤多糖的高碘酸氧化,Smith降解及GC分析28-31
• 3.3.5 文蛤多糖的甲基化反應及GC-MS分析31-33
• 3.3.6 文蛤多糖的核磁共振波譜分析33-34
• 3.4 本章小結34-35
• 第四章 文蛤多糖的體外抗氧化和免疫活性的初步研究35-46
• 4.1 引言35
• 4.2 材料與方法35-40
• 4.2.1 實驗材料與試劑35-36
• 4.2.2 儀器與設備36
• 4.2.3 實驗方法36-40
• 4.3 結果與分析40-44
• 4.3.1 文蛤多糖體外抗氧化結果40-43
• 4.3.2 文蛤多糖增強細胞免疫結果43-44
• 4.4 本章小結44-46
• 主要結論與展望46-47
• 主要結論46
• 存在問題46
• 展望46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-52
• 附錄1：作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文52-53
• 附錄2：論文主要圖譜53-55

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蕭志才;;《文始經》中“養(yǎng)氣蓄精”的養(yǎng)生之道[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2007年12期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李莉;文蛤多糖的提取純化、結構分析及抗氧化、免疫活性初步研究[D];江南大學;2015年

2 黃娟娟;章太炎《文始》研究[D];華中科技大學;2011年

3 劉智鋒;《文始·一》同族詞詞源意義系統(tǒng)研究[D];湖南師范大學;2010年

4 田野;《文始》初文考[D];北京語言大學;2006年

  本文關鍵詞：文蛤多糖的提取純化、結構分析及抗氧化、免疫活性初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：276546