【摘要】：研究目的和意義:研究國內(nèi)學(xué)者周仲瑛提出的藥方"周氏克金巖方"中的成分木犀草素(Luteolin)對人肺癌細胞生長抑制的效果并揭示出其作用機制,為腫瘤藥物的研發(fā)尋找新的方向。研究方法:在體外環(huán)境下培養(yǎng)人肺癌細胞H460,用DMSO溶液將木犀草素分別稀釋成濃度為10μM、15μM、20μM、25μM、30μM的溶液,加藥后,通過CCK8檢查肺癌細胞生長狀況,通過流式細胞儀檢查細胞周期以及細胞凋亡情況,PCR芯片檢測肺癌基因表達變化,WesternBlot 檢測對周期相關(guān)蛋白 DUSP6,DLC-1,JNK1,P-JNK1,CYD1P1,EGFR,ERBB2,PAK1,C-jun,NCK1,MEKK1 表達的影響。研究結(jié)果:CCK8檢查結(jié)果表明,木犀草素能夠有效地阻礙人肺癌細胞的增殖,阻礙作用的強弱和濃度、時間有關(guān),木犀草素溶液對H460細胞在10μM,15μM,20μM,25μM,30μM濃度時分別作用24h,36h和48h后,其OD值與對照組相比均有顯著差異。流式細胞儀分析結(jié)果顯示:人肺癌細胞經(jīng)木犀草素作用36h后,處于S期的細胞比例增多,G1和G2期細胞比例減少。和木犀草素接觸24h后,處于S期的細胞比例增多。說明細胞在木犀草素作用下在S期發(fā)生阻滯,并且呈濃度相關(guān)性。Annexin V測定結(jié)果表明,木犀草素作用24h后,處于Q2期(晚期凋亡)的H460細胞比例增加,人肺癌細胞H460經(jīng)木犀草素作用36h后,Q3(早期凋亡)比例增加,成濃度依賴性。芯片結(jié)果顯示,有5個符合條件并且表達較好的蛋白,分別是CYP1B1,DLC-1,EGFR,DUSP6,ERBB2。Westernblot結(jié)果顯示木犀草素作用于H460細胞36h后,DUSP6,DLC-1,P-JNK1 等蛋白的表達增強,CYD1P1,EGFR,ERBB2,NCK1,MEKK1,PAK1等蛋白的表達降低,且均呈劑量依賴性。JNK1與C-JUN蛋白表達沒有明顯變化。研究結(jié)論:木犀草素能明顯抑制人肺癌細胞H460的增殖,并且將細胞周期阻滯在S期,促進H460的凋亡,其機制可能和JNK通路的激活密切相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：2546598