【摘要】：背景認(rèn)知功能障礙(cognitive impairment,CI)是指認(rèn)知功能受到不同程度損害的狀態(tài),重者如各種類型癡呆,輕者如輕度認(rèn)知功能障礙等。認(rèn)知功能障礙在中醫(yī)文獻(xiàn)中沒有專門記載,依據(jù)其臨床表現(xiàn),如記憶力下降等,可歸屬于中醫(yī)學(xué)"健忘""善忘" "腦髓消""癡呆""呆病" "文癡"等病癥范疇。癡呆病位在腦,正氣虧虛為本,毒邪內(nèi)停為標(biāo),其基本病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜。治療上以中醫(yī)未病先防,既病防變的觀點(diǎn)為指導(dǎo),采用了扶正解毒的治則治法,應(yīng)用了具有益氣養(yǎng)血、滋陰清熱功效的中藥復(fù)方參知健腦方(SZJ)。缺氧時(shí),線粒體呼吸鏈電子傳遞及氧化磷酸化發(fā)生障礙,進(jìn)而導(dǎo)致電子傳遞鏈上酶活性抑制、氧化磷酸化水平降低,ATP合成減少、自由基產(chǎn)生增多等多種途徑損害細(xì)胞,致突觸減少,神經(jīng)傳導(dǎo)速度下降,神經(jīng)元壞死或凋亡而出現(xiàn)臨床認(rèn)知功能下降表現(xiàn)。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)SZJ組分可明顯改善A β所誘導(dǎo)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株的神經(jīng)毒性,并能有效改善AD大鼠模型的行為學(xué)。本研究將在既往研究基礎(chǔ)上通過缺氧建立認(rèn)知功能障礙大鼠模型,觀察SZJ對(duì)缺氧致認(rèn)知功能障礙模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、β-淀粉樣前體蛋白(βAPP)的含量、β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)的含量以及8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)為標(biāo)記物檢測(cè)線粒體DNA損傷。初步探討參知健腦方對(duì)大鼠腦線粒體損傷的保護(hù)作用機(jī)制,以及腦線粒體損傷與臟腑組織線粒體損傷之間的相關(guān)性,進(jìn)而從中醫(yī)的五臟整體觀的角度闡釋氣虛對(duì)人體學(xué)習(xí)記憶能力的影響,并為其提供理論依據(jù)。最終為參知健腦方對(duì)認(rèn)知功能障礙的預(yù)防及治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的運(yùn)用分子生物學(xué)的方法從線粒體角度觀察參知健腦方對(duì)缺氧致認(rèn)知功能障礙大鼠線粒體損傷的預(yù)防及保護(hù)機(jī)制。探討缺氧時(shí)相關(guān)臟腑線粒體損傷與腦線粒體損傷的相關(guān)性,以及SZJ對(duì)其的保護(hù)和預(yù)防機(jī)制。從中醫(yī)的五臟整體觀的角度闡釋氣虛對(duì)人體學(xué)習(xí)記憶能力的影響,并為其提供理論依據(jù),為參知健腦方的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。內(nèi)容與方法將老年大鼠分組,除正常組(A組)外按照實(shí)驗(yàn)要求給予缺氧處理,建立缺氧致線粒體損傷的認(rèn)知功能障礙模型組(B組)以及參知健腦方干預(yù)組(C組),造模為期八周,第八周時(shí)利用Morris水迷宮對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)大鼠腦及相關(guān)臟腑線粒體內(nèi)β-淀粉樣前體蛋白(βAPP)、β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)的含量,采用大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)為標(biāo)記物檢測(cè)線粒體DNA的損傷。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一,結(jié)果顯示,各組大鼠逃避潛伏期的比較,第一天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較有顯著性差異(P0.05),模型組與干預(yù)組比較有顯著性差異(P0.05)。第二天,正常組與模型組比較有顯著性差異(P0.05),正常組與干預(yù)組比較無顯著性差異,模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異。第三天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較有顯著性差異(P0.05),模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。第四天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較無明顯差異,模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。結(jié)果顯示,各組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)總路程的比較,第一天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較無明顯差異,模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。第二天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01),模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。第三天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01),模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。第四天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較有顯著性差異(P0.05),模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。結(jié)果顯示,空間探索原平臺(tái)象限游泳時(shí)間/總時(shí)間中,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較無顯著差異,模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。結(jié)果顯示,空間探索穿越目標(biāo)平臺(tái)次數(shù),正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較無顯著差異,模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。實(shí)驗(yàn)二,結(jié)果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中APP含量濃度/腦組織蛋白濃度,模型組與正常組、SZJ干預(yù)組間均差異顯著(P0.05)。結(jié)果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中Aβ1-42含量濃度/腦組織蛋白濃度比較,模型組與正常組、SZJ干預(yù)組間均差異顯著(P0.05)。結(jié)果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中8-OHdG含量濃度/腦組織蛋白濃度模型組與正常組、SZJ干預(yù)組間比較有明顯差異(P0.01),SZJ干預(yù)組與正常組間比較差異明顯(P0.05)。結(jié)果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中C0X含量濃度/腦組織蛋白濃度模型組與正常組有顯著差異(P0.01),與SZJ干預(yù)組間有比較明顯的差異(P0.05),SZJ干預(yù)組與正常組間比較無明顯差異。實(shí)驗(yàn)三,持續(xù)低壓缺氧造模八周后腎臟組織中線粒體DNA氧化損傷的檢測(cè)正常組與模型組組間差異顯著(P0.05),正常組與干預(yù)組組間無明顯差異,模型組與干預(yù)組組間比較組間有明顯差異(P0.05)。持續(xù)低壓缺氧大鼠腎組織中COX含量濃度/腎組織蛋白濃度值比較造模八周后正常組與模型組組間差異顯著(P0.05),正常組與干預(yù)組組間無明顯差異(P0.05),模型組與干預(yù)組組間比較組間有明顯差異(P0.05)。持續(xù)低壓缺氧大鼠脾臟組織中線粒體DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的檢測(cè)正常組與模型組之間比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01),模型組與干預(yù)組比較有顯著性差異(P0.05)。脾臟組織中COX活性的表達(dá),正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預(yù)組比較無明顯差異,模型組與干預(yù)組比較有極顯著性差異(P0.01)。結(jié)果顯示,持續(xù)低壓缺氧大鼠心臟組織中線粒體DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的檢測(cè)正常組與模型組之間比較有顯著性差異(P0.05),正常組與干預(yù)組比較無顯著差異,模型組與干預(yù)組比較有顯著性差異(P0.05)。心臟組織中COX活性的表達(dá),正常組與模型組比較無顯著性差異,正常組與干預(yù)組比較無明顯差異,模型組與干預(yù)組比較無顯著性差異。持續(xù)低壓缺氧大鼠肝臟組織線粒體中COX活性的表達(dá),正常組與模型組比較無顯著性差異,正常組與干預(yù)組比較無明顯差異,模型組與干預(yù)組比較無顯著性差異。結(jié)論缺氧致認(rèn)知功能障礙大鼠動(dòng)物模型的建立成功。參知健腦方可以抑制APP、Aβ1-42在大鼠腦部的積累和DNA氧化損傷,保護(hù)腦線粒體進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,進(jìn)一步改善缺氧對(duì)認(rèn)知功能障礙學(xué)習(xí)記憶能力的影響,為參知健腦方的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)支持。缺氧致Aβ1-42產(chǎn)生增多刺激神經(jīng)細(xì)胞,大量Ca2+內(nèi)流超載,線粒體腫脹功能紊亂,造成mtDNA缺失或突變,故缺氧致8-OHdG產(chǎn)量增多,即氧化損傷產(chǎn)物增多。缺氧造模時(shí)參知健腦方對(duì)線粒體有一定保護(hù)的作用,并對(duì)于缺氧造成的氧化損傷及COX酶的活性具有一定的保護(hù)作用,大鼠的空間記憶能力較模型組還是有一定改善,根據(jù)均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差可知,缺氧產(chǎn)生的8-OHdG越多對(duì)大鼠的認(rèn)知功能影響越大。缺氧時(shí)相關(guān)臟腑線粒體損傷與腦線粒體損傷的具有一定的相關(guān)性,基本呈現(xiàn)正相關(guān)的趨勢(shì),為中醫(yī)癡呆中腦與五臟整體觀提供了依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2490222