【摘要】：缺血性心腦血管疾病一直是困擾臨床醫(yī)生的難題,近年來,中醫(yī)藥在治療缺血導(dǎo)致的心腦血管損傷疾病方面具有較好的臨床經(jīng)驗(yàn)�？嗟幼⑸湟�(KDZI)是一種從菊科植物苦碟子全草提取有效活性物質(zhì)而被制成的中成藥,臨床上主要治療冠心病、腦血栓、心肌梗死等缺血性心腦血管疾病,常與其他藥物聯(lián)合使用,如注射用血栓通。由于絕大多數(shù)藥物的代謝都需要肝臟中的藥物代謝酶(CYP450)參與,同時(shí)藥物可誘導(dǎo)或抑制CYP450的活性。近年來,藥物聯(lián)合使用后的相互作用導(dǎo)致的不良反應(yīng)逐漸上升,從藥物代謝酶的角度,進(jìn)行藥物相互作用的探索為諸多學(xué)者的研究重點(diǎn)。KDZI與其他藥物合用后是否會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng),目前缺乏相關(guān)全面研究。由于藥物對(duì)肝CYP450活性的影響研究對(duì)探討藥物間的相互作用有著重要意義,故本課題旨在從藥物代謝酶的角度,采用"Cocktail"探針法結(jié)合超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-MS/MS)技術(shù)KDZI及2個(gè)主要倍半萜內(nèi)酯類化合物(IZ、DIZ)對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450酶活性的抑制作用。同時(shí),在負(fù)離子模式(ESI-)下,應(yīng)用超高效液相-線性離子阱-靜電軌道阱質(zhì)譜(UPLC-LTQ-Orbitrap MS)分析技術(shù)研究KDZI、IZ及DIZ的肝微粒體代謝情況,為其臨床安全合用藥物、安全性評(píng)估及毒理學(xué)研究等提供現(xiàn)代科學(xué)支持。以下為本課題主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果:1."Cocktail"探針法結(jié)合UPLC-MS/MS定量分析方法的建立參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》,制備大鼠肝微粒體,并運(yùn)用BCA試劑盒法測(cè)定其蛋白含量。根據(jù)FDA指南推薦,選擇非那西丁、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、睪酮和氯唑沙宗分別作為CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A和CYP2E1的探針底物;5種探針底物的特異性代謝型產(chǎn)物分別為對(duì)乙酰氨基酚、4-羥基甲苯磺丁脲、5-羥基奧美拉唑、6β-羥基睪酮和6-羥基氯唑沙宗。本文采用"Cocktail"探針法結(jié)合UPLC-MS/MS,以多奈哌齊為內(nèi)標(biāo),建立了同時(shí)測(cè)定5種探針底物代謝產(chǎn)物含量的方法。肝微粒體孵育樣品處理采用2倍體積冰冷乙腈蛋白沉淀法;色譜柱:WatersACQUITYBEHC18(1.7紐m,2.1×100mm);流動(dòng)相:甲醇/乙腈(v/v,1:1)-0.1%甲酸水系統(tǒng);流速:0.4mL.min-1;柱溫:40℃;梯度洗脫;正離子模式(ESI+)下,多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)(MRM)模式檢測(cè),并對(duì)所建立的分析方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)考察。方法學(xué)考察的結(jié)果提示建立的方法專屬性強(qiáng),靈敏度高,可以用于KDZI、IZ及DIZ對(duì)5種大鼠肝細(xì)胞色素P450酶活性抑制作用的研究。2.苦碟子注射液及其倍半萜內(nèi)酯類成分對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450酶活性的抑制作用研究利用UPLC-MS/MS結(jié)合"Cocktail,"探針法,并對(duì)肝微粒體孵育系統(tǒng)條件進(jìn)行優(yōu)化,研究KDZI、IZ及DIZ,對(duì)大鼠肝微粒體中5種主要的藥物代謝酶CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4和CYP2E1活性的抑制作用,并依據(jù)FDA指南推薦CYP450亞型的陽性抑制劑對(duì)優(yōu)化的孵育體系進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明,建立的孵育體系符合指南要求,IZ對(duì)CYP2C19的IC50值是21.76 μmol·L-1,對(duì)其有微弱的抑制作用,對(duì)CYP3A4的IC50值是 145.1 μmol.L-1,對(duì) CYP1A2 和 CYPP2C9 的 IC50 值大于 200 μmol.L1,對(duì) CYP2E1無抑制作用。DIZ對(duì)CYPP2C9的IC50值是9.46 μmol·L-1,對(duì)CYP2C9有中等程度抑制作用,對(duì) CYP1A2 和 CYP2C19 的 IC50 值大于10 μ0mol·L-1,對(duì) CYP2E1、CYP3A4 無抑制作用。KDZI 對(duì) CYP3A4 的 IC50 值是 9.18%,對(duì) CYP2C9、CYP2C19 的 IC50 值大于8.00%,對(duì)CYP1A2的IC50值大于10.00%,對(duì)CYP2E1無抑制作用。3.苦碟子注射液及其倍半萜內(nèi)酯類成分的肝微粒體代謝研究制備KDZI、IZ及DIZ的肝微粒體溫孵樣品,基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS技術(shù),分別對(duì)KDZI、IZ及DIZ的肝微粒體代謝進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,19個(gè)化合物被檢測(cè)(包括2個(gè)原型化合物和17個(gè)代謝產(chǎn)物被篩選),其中鑒別了 2個(gè)原型化合物和16個(gè)代謝產(chǎn)物,代謝產(chǎn)物主要發(fā)生羥基化,加氫,脫氫的I相代謝反應(yīng)。結(jié)果表明,KDZI、IZ及DIZ經(jīng)肝微粒體代謝后主要發(fā)生包括羥基化、加氫、去氫等I相代謝反應(yīng),此外,還發(fā)生了半胱氨酸、谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)。此研究結(jié)果,有助于探討KDZI、IZ及DIZ的肝微粒體代謝規(guī)律,為其進(jìn)一步的安全性、毒理學(xué)研究提供新的支持。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳丹;林秀賢;陳堯;;CYP2E1調(diào)控酒精性肝病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2017年02期

2 鄭造乾;駱瑾瑜;陳燕華;王小軍;;探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)苦碟子注射液對(duì)大鼠肝微粒體CYP3A4的體外抑制作用[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2017年02期

3 許菊青;蔣峰;;CYP3A4、CYP3A5多態(tài)性與腫瘤的關(guān)系[J];實(shí)用老年醫(yī)學(xué);2017年01期

4 夏日東;王莉;;CYP2A6基因多態(tài)性研究進(jìn)展[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2016年18期

5 李鎮(zhèn);容悅瑩;王淑美;吳純偉;;中藥組方配伍的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年07期

6 馮素香;王蒙蒙;吳兆宇;李先;郝蕊;徐艷華;;大黃苷元對(duì)大鼠藥物代謝酶CYP2A6、CYP3A4活性的影響[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2014年06期

7 韓露;陳真;;CYP2E1在酒精性肝病中的作用[J];安徽醫(yī)藥;2014年06期

8 姜艷彬;單吉浩;王瑩;蔡英華;田亞平;;LC-MS/MS技術(shù)在藥物代謝研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J];藥物分析雜志;2014年03期

9 劉麗雅;韓永龍;余奇;朱金輝;郭澄;;10種心血管類中藥注射劑對(duì)人細(xì)胞色素P_(450)7種亞型的體外抑制作用[J];中國(guó)藥房;2014年11期

10 譚妍;莊笑梅;沈國(guó)林;李樺;高月;;川芎嗪的肝微粒體代謝動(dòng)力學(xué)及代謝表型研究[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

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本文編號(hào)：2437564