【摘要】：神經(jīng)病理性疼痛在臨床上屬于一種難治性的慢性疼痛病癥,因其高發(fā)病率和低治愈率日益受到國內(nèi)外多學(xué)科的關(guān)注。在神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制研究中,TRPs通道受到廣泛關(guān)注,尤其是主要表達(dá)在背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglia,DRG)和三叉神經(jīng)節(jié)(n.trigminus,TG)小直徑神經(jīng)元上的TRPV1(瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1,Transient Receptor Potential Vanilloid 1),被認(rèn)為與疼痛的關(guān)系尤為密切,是炎癥和疼痛通路的門控分子,在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用。TRPV1被認(rèn)為是治療急、慢性疼痛藥物研發(fā)最具前景的作用靶點(diǎn)之一。乳香和沒藥在疼痛的治療中表現(xiàn)出鮮明的特色和良好的效果,二者在臨床上常被作為一組藥對使用,來獲得協(xié)同鎮(zhèn)痛的效果,但是其鎮(zhèn)痛的機(jī)制尚不清楚。為了揭示乳香和沒藥的鎮(zhèn)痛機(jī)制,本論文建立了小鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型(chronic constriction injury,CCI),觀察乳香-沒藥水提液(A combined water extract of frankincense andmyrrh,WFM)對CCI所致神經(jīng)病理性疼痛痛覺敏化的影響,并圍繞TRPV1開展乳香-沒藥水提液緩解神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制研究。目的:探討乳香-沒藥水提液在小鼠神經(jīng)病理性疼痛模型中的鎮(zhèn)痛作用和相關(guān)的神經(jīng)機(jī)制。方法:(1)C57BL/6小鼠,雄性,6-8周,8只,灌胃給予乳香-沒藥水提液(7.5 g/kg),分別于給藥前、給藥后1、2、3、4、5小時(shí)50℃水浴浸尾,記錄小鼠出現(xiàn)甩尾的時(shí)間。(2)16只小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組(Saline)和WFM(7.5 g/kg),提前3小時(shí)分別灌胃給予生理鹽水和WFM,然后右腳掌注射辣椒素(3 μg/mouse),錄像并統(tǒng)計(jì)小鼠舔腳的次數(shù)和時(shí)間。(3)72只小鼠隨機(jī)分為6組(每組12只):①空白(na1ve)組:正常野生型(wild type mice,WT)小鼠+蒸餾水(vehicle);②假手術(shù)(sham)組:假手術(shù)WT小鼠+蒸餾水;③坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型(CCI)組:CCIWT小鼠+蒸餾水;④乳香-沒藥水提液低劑量(WFM-L)組:CCIWT小鼠+WFM-L(WFM,1.5g/kg/day);⑤乳香-沒藥水提液高劑量(WFM-H)組:CCIWT小鼠+WFM-H(WFM,7.5g/kg/day);⑥加巴噴丁(GBPT)組:CCI WT小鼠+ GBPT(GBPT,0.2 g/kg/day)。每組小鼠從第7天開始灌胃給蒸餾水或乳香-沒藥水提液或加巴噴丁,連續(xù)10天,到第16天結(jié)束,同組小鼠每天灌胃給藥的體積是等量的,且由同一人操作。(4)6組小鼠分別于術(shù)后第1、3、5、7、10、13、16天稱體重、VonFrey測機(jī)械縮足閾值(MWT)、熱輻射儀測熱縮足反射潛伏期(TWL)。(5)取小鼠腰4、5及骶部的DRG,采用免疫熒光染色、實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(q-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting)觀察各組小鼠TRPV1表達(dá)活性變化。(6)取小鼠腰4、5及骶部的DRG,通過鈣離子成像技術(shù)觀察各組小鼠DRG神經(jīng)元TRPV1生理活性的變化。結(jié)果:(1)灌胃給予乳香-沒藥水提液后小鼠對傷害性熱刺激的敏感性顯著下降,第3、4、5小時(shí)與對照相比都有顯著差異。(2)乳香-沒藥水提液灌胃處理后,腳掌注射辣椒素所致小鼠的舔腳次數(shù)和時(shí)間較生理鹽水組都顯著減少。(3)CCI小鼠體重略有下降,各組小鼠的體重?zé)o顯著性差異。(4)從術(shù)后第5天開始小鼠的機(jī)械縮足閾值和熱縮足反射潛伏期都顯著下降,以第7天左右下降最明顯,第7天開始熱縮足反射潛伏期略有回升,械縮足閾值仍在繼續(xù)下降。第16天的機(jī)械縮足閾值和熱縮足反射潛伏期統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:naive組和sham組沒有顯著變化;與sham組相比,CCI組則顯著下降(P0.001);與CCI組相比WFM-L組、WFM-H組、GBPT組,機(jī)械縮足閾值和熱縮足反射潛伏期都顯著升高(P0.05或P0.001)。(5)免疫熒光染色統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明:與sham組相比CCI組TRPV1陽性神經(jīng)元比例顯著增加(P0.001),而WFM-H組、GBPT組與CCI組相比,TRPV1陽性神經(jīng)元的比例顯著減少(P0.05或P0.001)。(6)TRPV1基因和蛋白的相對定量結(jié)果發(fā)現(xiàn):與sham組相比CCI組TRPV1的表達(dá)顯著增加(P0.001)而WFM-H組、WFM-L組、GBPT組與CCI組相比顯著減少(P0.01或P0.05)。(7)鈣成像實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):與sham組相比CCI組DRG神經(jīng)元對TRPV1激動劑辣椒素(capsaicine)的反應(yīng)大小和比例都顯著增加(P0.001),而WFM-H組、GBPT組DRG神經(jīng)元對辣椒素反應(yīng)的比例與CCI組相比顯著下降(P0.05或P0.001),WFM-L組也有下降的趨勢,但沒有顯著性差異;WFM-H組、WFM-L組、GBPT組DRG神經(jīng)元對辣椒素反應(yīng)的大小與CCI組相比都有顯著下降(P0.001)。結(jié)論:WFM通過抑制TRPV1的表達(dá)和活性緩解了 CCI誘導(dǎo)的小鼠神經(jīng)病理性疼痛。
[Abstract]:Neuropathic pain (NP) is a refractory chronic pain disorder in clinic, which has attracted more and more attention from many disciplines at home and abroad because of its high incidence and low cure rate. TRPV1 (Transient Receptor Potential Vanilloid 1) on small-diameter neurons of the menstrual ganglion (TG) is thought to be closely related to pain, and is a gated molecule in inflammatory and pain pathways, which plays an important role in the development of neuropathic pain. Frankincense and myrrh have shown distinct characteristics and good effects in the treatment of pain. They are often used as a group of drugs in clinic to achieve synergistic analgesic effect, but the mechanism of analgesia is still unclear. In order to reveal the analgesic effect of frankincense and myrrh Mechanisms: A combined water extract of frankincense and myrrh (WFM) was used to observe the effects of chronic constriction injury (CCI) on the sensitization of neuropathic pain induced by CCI in mice, and a frankincense-myrrh (WFM) aqueous extract was developed around TRPV1 to relieve neuropathic pain. Objective: To investigate the analgesic effect of Ruxiang-myrrh aqueous extract on neuropathic pain model in mice. Methods: (1) C57BL/6 mice, male, 6-8 weeks, 8 mice, were given Ruxiang-myrrh aqueous extract (7.5 g/kg) by gastric lavage, and were soaked in water bath at 50 C for 1,2,3,4,5 hours before and after administration respectively. (2) Sixteen mice were randomly divided into saline group (Saline) and WFM (7.5 g/kg), given saline and WFM three hours earlier, then injected capsaicin (3 ug/mouse) into the right paw, and recorded the times and time of licking feet. (3) 72 mice were randomly divided into 6 groups (12 mice in each group): blank (na1ve) group: normal field Wild type mice (WT) mice + distilled water (vehicle); sham operation (sham) group: sham operation WT mice + distilled water; chronic sciatic nerve compression (CCI) group: CCIWT mice + distilled water; frankincense-myrrh water extract low dose (WFM-L) group: CCIWT mice + WFM-L (WFM, 1.5g/kg/day); high dose of mastic-myrrh water extract (WFM-H) group: CCI WFM-H group: CCIWT small. Rats + WFM-H (WFM, 7.5 g/kg/day); _Gabapentin (GBPT) group: CCI WT mice + GBPT (GBPT, 0.2 g/kg/day). Each group of mice was given distilled water or frankincense-myrrh aqueous extract or gabapentin from the 7th day for 10 consecutive days until the end of the 16th day. The same group of mice were given the same amount of gabapentin daily and operated by the same person. Weight was weighed on the 1st, 3rd, 5th, 7th, 10th, 13th and 16th day after operation, mechanical foot shrinkage threshold (MWT) was measured by Von Frey, and latency of foot shrinkage reflex (TWL) was measured by thermal radiometer. Results: (1) The sensitivity of mice to noxious thermal stimulation was significantly decreased after administration of frankincense-myrrh aqueous extract by intragastric administration, and there were significant differences between the 3, 4 and 5 hours after administration of frankincense-myrrh aqueous extract and the control group. (3) The weight of CCI mice decreased slightly, and there was no significant difference among the groups. (4) From the 5th day after operation, the mechanical shrinkage threshold and the latency of heat shrinkage reflex of mice decreased significantly, to about 7 days. The mechanical shrinkage threshold and thermal shrinkage latency showed no significant changes on the 16th day. Compared with sham group, CCI group decreased significantly (P 0.001); WFM-L group, WFM-H group, GBPT group. The percentage of TRPV1 positive neurons in CCI group was significantly higher than that in sham group (P 0.001), while that in WFM-H group and GBPT group was significantly lower than that in CCI group (P 0.05 or P 0.001). Compared with sham group, the expression of TRPV1 in CCI group was significantly increased (P 0.001), while that in WFM-H group, WFM-L group, GBPT group and CCI group was significantly decreased (P 0.01 or P 0.05). (7) Calcium imaging showed that compared with sham group, the response of DRG neurons to capsaicine in CCI group was significantly increased (P 0.0). The percentage of DRG neurons responding to capsaicin in WFM-H, GBPT and WFM-L groups decreased significantly (P 0.05 or P 0.001), but there was no significant difference between WFM-H, WFM-L, GBPT and CCI groups. Conclusion: WFM can inhibit TRPV1 by inhibiting the response of DRG neurons to capsaicin in WFM-H, WFM-L and GBPT groups (P 0.001). Expression and activity alleviated CCI induced neuropathic pain in mice.
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2249191