本文關(guān)鍵詞：小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞與PHBHHx膜體外共培養(yǎng)并制作心肌補片的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《首都醫(yī)科大學(xué)》 2015年

小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞與PHBHHx膜體外共培養(yǎng)并制作心肌補片的實驗研究

許士俊  

【摘要】：目的:通過3-羥基丁酸與3-羥基己酸的共聚酯膜(PHBHHx膜)與小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(miPSCs)體外共培養(yǎng),研究這種新型的高分子材料對miPSCs粘附、存活及分化的影響;進(jìn)而找到一種適合小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞生長、增殖及分化的高分子生物材料,制作心肌補片,作為治療心肌梗死等疾病的新方法。方法:復(fù)蘇miPSCs,傳代培養(yǎng)后,將miPSCs與PHBHHx二維膜和PHBHHx三維膜(膜上有孔徑,模仿三維空間)共培養(yǎng),72小時后固定并進(jìn)行掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài),CCK-8法檢測細(xì)胞活力,DAPI熒光染色觀察細(xì)胞在PHBHHx膜上細(xì)胞粘附情況。用含和不含維生素C的分化培養(yǎng)基對其進(jìn)行誘導(dǎo)分化,21天后通過免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞分化情況,測定心肌細(xì)胞特異性蛋白cTnT和a-actinin的含量來分析PHBHHx膜對miPSCs向心肌細(xì)胞分化的影響。結(jié)果:miPSCs可以在PHBHHx膜上良好的粘附和存活,細(xì)胞在PHBHHx膜上可以保持正常形態(tài)。培養(yǎng)72小時后CCK-8法檢測細(xì)胞活力顯示,PHBHHx三維膜培養(yǎng)在450nm處的吸光度值為0.836±0.038PHBHHx二維膜培養(yǎng)吸光度值0.617±0.018傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)0.312±0.003(p0.05)。維生素C作為一種良好的體外誘導(dǎo)劑,可以極大地促進(jìn)miPSCs向心肌細(xì)胞分化,誘導(dǎo)分化21天后免疫熒光測定心肌細(xì)胞特異性蛋白cTnT表達(dá)陽性;流式細(xì)胞術(shù)測定cTnT和a-actinin均表達(dá)陽性,其中cTnT的表達(dá)量:加維生素C誘導(dǎo)劑組cTnT為(47.54%±1.46%)未加任何誘導(dǎo)劑組(7.02%±0.95%)(p0.05)。在miPSCs和PHBHHx膜共培養(yǎng)向心肌細(xì)胞分化過程中,在添加維生素C誘導(dǎo)劑的情況下,PHBHHx三維膜細(xì)胞培養(yǎng)分化cTnT的表達(dá)量為(60.32%±1.76%)PHBHHx二維膜細(xì)胞培養(yǎng)分化cTnT的表達(dá)量(53.31%±1.41%)傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)(47.54%±1.46%)(p0.05)。a-actinin的表達(dá)量:加維生素C誘導(dǎo)劑組a-actinin為(48.38%±1.32%)未加任何誘導(dǎo)劑組(7.01%±0.87%)(p0.05)。在miPSCs和PHBHHx膜共培養(yǎng)向心肌細(xì)胞分化過程中,在添加維生素C誘導(dǎo)劑的情況下,PHBHHx三維膜細(xì)胞培養(yǎng)分化a-actinin的表達(dá)量(60.21%±1.58%)PHBHHx二維膜細(xì)胞培養(yǎng)分化a-actinin的表達(dá)量(55.40%±1.14%)傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)(48.32%±1.32%)(p0.05)。結(jié)論:1、miPSCs與PHBHHx膜具有良好的組織相容性,可以在PHBHHx膜上粘附、增殖和分化;2、維生素C能夠極大地提高miPSCs向心肌細(xì)胞分化的效率;3、通過對比PHBHHx三維膜、PHBHHx二維膜和傳統(tǒng)的培養(yǎng)皿培養(yǎng)三種培養(yǎng)方式,三維PHBHHx膜培養(yǎng)在miPSCs的增殖以及向心肌細(xì)胞分化過程中具有很大的優(yōu)勢。因此,PHBHHx膜有希望作為干細(xì)胞治療心肌梗死等疾病理想的心肌補片材料

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22
【目錄】：

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本文編號：220134