【摘要】：目的:孤立低高密度脂蛋白膽固醇表型(Isolated low high-density lipoprotein cholesterol phenotype)是除血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平降低外,低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)的水平均在正常參考范圍內(nèi)的一種血脂異常表型。流行病學(xué)調(diào)查顯示,孤立低HDL-C表型作為亞洲人群中最常見的血脂異常表現(xiàn)之一,與冠心病的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。孤立低HDL-C表型與心血管疾病在炎性因子,內(nèi)皮功能紊亂,巨噬細(xì)胞膽固醇反向轉(zhuǎn)運(yùn)等過程中具有較多共性。本研究利用孤立低HDL-C表型,通過microRNA生物信息學(xué)檢索與芯片數(shù)據(jù)分析等整合技術(shù),探討了動(dòng)脈粥樣硬化調(diào)節(jié)性miR-222-3p、ApoE基因多態(tài)性與孤立低HDL-C表型間的關(guān)系。旨在為心血管病相關(guān)循環(huán)mi RNAs候選標(biāo)志物的篩選、驗(yàn)證以及臨床意義的闡明提供一種新的解決方案。方法:1利用生物信息學(xué)的檢索方法和手段,圍繞ERK2所介導(dǎo)的ABCA1信號(hào)途徑相關(guān)的HDL-C調(diào)節(jié)作用,對(duì)miRWalk、mi RBase數(shù)據(jù)庫以及不穩(wěn)定型心絞痛相關(guān)的循環(huán)micro RNAs芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析,結(jié)合mi RNAs功能特點(diǎn),篩選和確定ERK2、心血管疾病關(guān)聯(lián)的循環(huán)miRNAs候選分子。2選取2014年8月1日至2015年11月30日,年齡在20~55歲之間,在唐山市工人醫(yī)院體檢科進(jìn)行體檢,且符合入組標(biāo)準(zhǔn)的174例研究對(duì)象。其中孤立低HDL-C表型組(Isolated low HDL-C phenotype,ILHP)88例,正常血脂表型組(Normal lipid phenotype,Control)86例。提取兩組血漿總RNAs,利用Taq Man microRNA檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)血漿miR-222-3p表達(dá)水平,以miR-191-5p血漿表達(dá)水平為內(nèi)參,進(jìn)行歸一化處理,采用2-?Ct表示相對(duì)表達(dá)量。3提取174例體檢人群外周血白細(xì)胞基因組DNA,采用由美國應(yīng)用生物公司(ABI)開發(fā)的SNaPshot技術(shù)和3730XL DNA測(cè)序平臺(tái),檢測(cè)ApoE基因rs429358和rs7412兩位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,snp)。4采用r3.0.2軟件和graphpadprism5.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料首先使用d`agostinoandpearsonomnibusnormalitytest方法進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),正態(tài)性數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用方差性檢驗(yàn);非正態(tài)性數(shù)據(jù)以中位數(shù)(四分位數(shù))[m(p25,p75)]表示,兩組間樣本比較采用wilcoxonranksum檢驗(yàn),多組間比較采用dunnmultiplecomparisontest非參數(shù)多重檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用spearman相關(guān)分析方法。風(fēng)險(xiǎn)因素分析采用二元或多重logistic回歸模型分析。以p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1經(jīng)過erk2相關(guān)的mirnas預(yù)測(cè)、不穩(wěn)定型心絞痛循環(huán)mirnas芯片數(shù)據(jù)分析以及mirnas功能分析,確認(rèn)定位于xp11.3、血漿水平高表達(dá)且與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的mir-222-3p作為候選標(biāo)志物;2孤立低hdl-c表型組(88例)循環(huán)mir-222-3p的表達(dá)水平高于正常血脂表型組(86例)[0.38(0.10,0.70)vs0.16(0.04,0.41)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(w=2664,p0.001);3男性組(90例)、女性組(84例)血漿mir-222-3p的表達(dá)水平分別為0.27(0.05,0.51)和0.27(0.07,0.57),組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(w=3916,p=0.683);4dunnmultiplecomparisontest非參數(shù)多重檢驗(yàn)顯示,男性孤立低hdl-c表型組(45例)血漿mir-222-3p表達(dá)水平顯著高于男性正常血脂表型組(45例),組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義0.35(0.16,0.66)vs0.15(0.03,0.33),p=0.016;女性孤立低hdl-c表型組(43例)血漿mir-222-3p表達(dá)水平高于女性正常血脂表型組(41例),組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義0.41(0.07,0.71)vs0.17(0.07,0.43),p=0.046;5spearman相關(guān)分析顯示,血漿mir-222-3p表達(dá)水平與hdl-c水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.20,p=0.008)。二元logistic回歸模型分析顯示,血漿mir-222-3p高表達(dá)個(gè)體表現(xiàn)出孤立低hdl-c表型的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)增加5.45倍(or=5.45,95%ci:1.99 14.88,p0.001);經(jīng)年齡、性別、血脂、肝功能、血常規(guī)等臨床參數(shù)和檢驗(yàn)指標(biāo)調(diào)整后,其相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)增加8.42倍(OR=8.42,95%CI:2.53 27.98,P0.001);6哈迪-溫伯格平衡(Hardy-weinberg equilibrium,HWE)檢驗(yàn)顯示,ApoE基因型頻率在孤立低HDL-C表型組和正常血脂表型組中的結(jié)果分別為:χ2=5.20,P=0.267;χ2=6.18,P=0.186,說明ApoE等位基因頻率符合孟德爾隨機(jī)遺傳定律,具有群體代表性;7ApoE基因型ε2/ε3、ε2/ε4、ε3/ε3、ε3/ε4、ε4/ε4在孤立低HDL-C表型組頻數(shù)(頻率)依次為9(10.23%)、3(3.41%)、65(73.86%)、10(11.36%)、1(1.14%);在正常血脂表型組頻數(shù)(頻率)依次為21(24.42%)、4(4.65%)、54(62.79%)、7(8.14%)、0(0.00%)。ApoE等位基因ε2、ε3、ε4在孤立低HDL-C表型組頻數(shù)(頻率)依次為12(6.82%)、149(84.66%)、15(8.52%);在正常血脂表型組頻數(shù)(頻率)依次為25(14.53%)、136(79.07%)11(6.40%)。Fisherχ2卡方檢驗(yàn)顯示,ApoE基因型、等位基因組間分布情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.43,P=0.081;χ2=5.73,P=0.057);8多元Logistic回歸分析顯示,ApoE2基因型攜帶者較ApoE3基因型攜帶者血清LDL-C水平有所降低(RRR=0.03,95%CI:0.00 0.27,P=0.002);與孤立低HDL-C表型無相關(guān)性(RRR=0.40,95%CI:0.09 1.78,P=0.230)。與血漿mi R-222-3p水平無相關(guān)性(RRR=1.54,95%CI:0.36 6.68,P=0.562)。結(jié)論:1循環(huán)miR-222-3p水平能詮釋孤立低HDL-C表型的部分分子病理特點(diǎn),個(gè)體血漿miR-222-3p水平升高,孤立低HDL-C表型相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)增加。2ApoE基因多態(tài)性與孤立低HDL-C表型無關(guān),與循環(huán)miR-222-3p表達(dá)水平無關(guān)。3證實(shí)了以孤立低HDL-C表型為人類模型,輔助闡明心血管疾病相關(guān)循環(huán)miRNA臨床意義的可行性。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between low density lipoprotein cholesterol ( LDL - C ) and triglyceride ( TG ) in isolated low HDL - C phenotype . 姝ｆ，

本文編號(hào)：2124856