本文選題：楊梅素 + 膿毒癥心肌病　； 參考：《湖北科技學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：背景:膿毒癥是ICU(intensive care unit,ICU)患者死亡的最主要原因之一,而膿毒癥導(dǎo)致的心功能不全(sepsis induced myocardial dysfunction,SIMD)是膿毒癥患者最嚴(yán)重并發(fā)癥之一。研究表明炎癥、氧化應(yīng)激和心肌細(xì)胞凋亡是SIMD發(fā)生發(fā)展三大關(guān)鍵因素。楊梅素(Myricetin,M)屬于多酚類天然化合物,研究表明其具有抗炎、抗氧化、延緩衰老和保護(hù)心血管系統(tǒng)等多種藥理作用。目前有關(guān)楊梅素在脂多糖誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥心肌病中的保護(hù)作用及機(jī)制還未見報道。目的:探討楊梅素在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥心肌炎模型和LPS誘導(dǎo)心肌細(xì)胞炎性損傷中的作用及機(jī)制,為臨床治療尋找新藥。方法:1)H9C2細(xì)胞培養(yǎng)于37℃恒溫二氧化碳培養(yǎng)箱,待細(xì)胞長滿培養(yǎng)皿底部約90%面積時,用0.25%胰酶消化傳代培養(yǎng)后加入藥物干預(yù)。用CCK-8試劑盒檢測楊梅素對H9C2細(xì)胞活性的影響。2)動物實驗中,選擇健康成年的雄性C57小鼠(體重:24-25g)100只,隨機(jī)分為對照組(CON,n=25),藥物組(M,200mg/kg per day,n=25),脂多糖處理組(LPS,15mg/kg靜脈給藥一次,n=25),LPS+M組(n=25)。M組和LPS+M組小鼠提前給予楊梅素200mg/kg/d 5天,然后給予15mg/kg的LPS靜脈給藥一次,12h后超聲評估小鼠心功能后斷椎處死小鼠,收集小鼠心臟,隨機(jī)分配至組織病理組和分子生物學(xué)組。3)心臟組織冰凍切片和細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫熒光染色觀察體內(nèi)外NF-κB核轉(zhuǎn)位;用TUNEL染色檢測心臟組織和H9C2細(xì)胞凋亡情況;蛋白印記檢測炎癥信號通路(IκBα/NF-κB/p65)、炎癥因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)和凋亡相關(guān)蛋白(Bcl2,Bax,C-Caspase3);實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)用于測定炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的m RNA表達(dá)水平;用試劑盒分離細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白用于定量檢測NF-κB核轉(zhuǎn)位。4)氧化應(yīng)激試劑盒用于檢測體內(nèi)外活性氧ROS水平以及GPx和SOD酶活性。結(jié)果:1)體外毒性試驗中0,5,10,20,40,80和160μM楊酶素分別處理H9C2細(xì)胞18小時,結(jié)果顯示小于或等于40μM的楊梅素對H9C2細(xì)胞無毒性,不影響細(xì)胞生長;2)超聲評估顯示楊梅素能夠顯著改善脂多糖誘導(dǎo)的小鼠心功能損傷,表現(xiàn)為增加小鼠左室射血分?jǐn)?shù)(EF)和短軸縮短率(FS),縮減左室舒張末期內(nèi)徑和收縮末期內(nèi)徑,增加舒張末期左心室后壁厚度和收縮末期左心室后壁厚度,縮減左室舒張末期容積和收縮末期容積,改善心臟收縮和舒張功能,減輕左室內(nèi)血液潴留。3)體內(nèi)外實驗證實楊梅素顯著抑制IκBα/NF-κB/p65信號通路的激活,表現(xiàn)為抑制IκBα和p65磷酸化水平的增加和p65細(xì)胞核轉(zhuǎn)位;受IκBα/NF-κB/p65調(diào)控的炎癥因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)表達(dá)顯著降低。體內(nèi)外實驗證實楊梅素能夠顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞和心肌細(xì)胞的凋亡,表現(xiàn)為TUNEL陽性信號的顯著減少;進(jìn)一步的印跡表明,楊梅素能夠增強(qiáng)抗凋亡蛋白Bcl2的表達(dá),抑制促凋亡蛋白Bax和C-Caspase3的表達(dá)。4)體內(nèi)外實驗證實楊梅素顯著抑制ROS的產(chǎn)生,恢復(fù)抗氧化酶(GPx和SOD)活性。結(jié)論:在體內(nèi)外模型中證實,LPS誘導(dǎo)心肌細(xì)胞和心臟組織的炎癥反應(yīng),表現(xiàn)為炎癥信號通路的活化和炎癥相關(guān)因子的分泌,同時氧化應(yīng)激導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS聚積和抗氧化酶的活性降低,炎癥和氧化應(yīng)激促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡和心臟功能受損;體內(nèi)外給予楊梅素均能改善脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),保護(hù)小鼠心臟功能,其作用機(jī)制與楊梅素的抗炎、抗氧化和抗凋亡的作用相關(guān)。楊梅素是SIMD的潛在治療或輔助治療藥物。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect and mechanism of Myricillin ( M ) on mice with sepsis induced by lipopolysaccharide ( LPS ) . The results showed that Yangmei could significantly inhibit the expression of NF - 魏B 偽 / NF - 魏B and the expression of anti - apoptotic proteins ( GPx and SOD ) .
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 林國鋇;謝燕;李國文;;楊梅素的研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2012年06期

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本文編號：2108978