本文選題：左旋樟腦 + 腦缺血　； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的眾所周知,腦缺血再灌注后會造成腦部特定區(qū)域的神經(jīng)細胞損傷,然而這種損傷機制尚不清楚。前期我們課題組的實驗研究表明,左旋樟腦能夠保護腦缺血再灌注損傷,然而,對于這種保護機制的研究還很少。有研究表明,腦缺血再灌注可能會導致神經(jīng)細胞突起損傷,而缺血損傷和壞死物質的刺激會致使自噬、凋亡過度激活,使得細胞內(nèi)容物降解過多引發(fā)細胞死亡,導致組織器官嚴重損傷。保護神經(jīng)細胞突起以及抑制凋亡與自噬過度激活可能作為一種新的缺血性腦損傷的干預靶點,成為腦缺血再灌注基礎研究與潛在臨床應用的新熱點。本課題主要研究左旋樟腦對腦缺血再灌注損傷的機制,初步探討左旋樟腦在腦缺血損傷中的保護作用。前期課題組有實驗證明左旋樟腦保護神經(jīng)細胞是通過抑制凋亡效應、抑制腦缺血再灌注損傷后自噬的過度激活,其機制可能是作用于GABAA受體靶向P53影響機體。還證明部分MicroRNA通過調控其靶基因參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持,左旋樟腦、MicroRNA等可能在腦缺血再灌注后的病理生理過程中扮演著某種重要角色。實驗方法1.運用大鼠右側頸動脈插線制備腦缺血動物模型,造模后對大鼠進行神經(jīng)功能性評分。并觀察左旋樟腦作用24h能否影響腦缺血再灌注動物模型的神經(jīng)功能性評分。再斷頭取腦,取新鮮的大鼠皮質,進行MiroRNA基因芯片分析。依據(jù)基因芯片分析結果挑選miR-125a等作為研究對象,qRT-PCR檢測miR-125a等在左旋樟腦作用下的表達情況。2.在生物信息學軟件上預測miR-125a可能存在的相關靶點,構建特異性表達的rno-miR-125a-3p模擬物和抑制物,轉染進PC12細胞,經(jīng)免疫熒光檢測觀察相關靶蛋白表達情況,與正常組、模型組相比,檢測miR-125a是否與蛋白Cadm2的表達相關。3.轉染特異性表達的rno-miR-125a-3p模擬物和抑制物以及相應的陰性對照物進入PC12細胞后,經(jīng)Western Blot進行功能性驗證;通過構建靶基因-3' UTR區(qū)含rno-miR-125a-3p的結合位點的雙熒光素酶報告基因進一步驗證Cadm2和miR-125a的關系。4.轉染特異性表達的rno-miR-l25a-3p模擬物和抑制物以及相應的陰性對照物至PC12細胞,經(jīng)ImagJ檢測miR-125a-3p與PC12細胞的梭形細胞比率,分化率以及平均長度之間是否存在關聯(lián)。5.rno-miR-125a-3p模擬物和抑制物以及陰性對照物轉染至PC12細胞后,無血清處理的同時加入左旋樟腦,采用Western blot法檢測凋亡相關蛋白(caspase-3)和自噬相關蛋白(LC3、P62)表達情況。實驗結果1.本實驗在腦缺血再灌注動物模型基礎上,在給藥前后進行行為學評分。結果發(fā)現(xiàn)左旋樟腦能降低腦缺血再灌注損傷動物模型的行為學評分。取新鮮皮質進行基因芯片分析,結果顯示,與對照組相比,模型組中miR-125a的表達升高明顯。qRT-PCR結果顯示,與模型組相比,左旋樟腦能抑制腦缺血再灌注動物模型中的miR-125a表達,且P0.05具有統(tǒng)計學意義。2.生物信息學預測miR-125a的潛在靶點可能是Cadm2。轉染后免疫熒光測結果顯示,與對照組、模型組相比,miR-125a模擬物組中Cadm2的表達下降,抑制物組中Cadm2的表達上升(P0.05具有統(tǒng)計學意義)。3.經(jīng)Western Blot和報告基因驗證,實驗結果顯示,與正常組以及陰性對照組比,模擬物組中的Cadm2的表達下降,抑制物組中Cadm2上升明顯且P0.05具有統(tǒng)計學意義;報告基因驗證驗證的結果也與Western Blot實驗結果相驗證。4.ImagJ檢測PC12細胞的梭形細胞比率,分化率以及平均長度,發(fā)現(xiàn)與正常組以及陰性對照組比,miR-125a模擬物組的各指標都受到抑制,而抑制物組中各組指標都有上升(P0.05具有統(tǒng)計學意義)。5.rno-miR-125a-3p模擬物能抑制血清饑餓誘導下Cadm2和P62的表達,促進caspase-3和LC3表達;而左旋樟腦和rno-miR-125a-3p抑制物能促進血清饑餓誘導下Cadm2及P62的表達,抑制caspase-3和LC3表達,而當左旋樟腦與rno-miR-125a-3p抑制物合用時,上述結果更為明顯(P0.05具有統(tǒng)計學意義)。結論在缺血性再灌注動物模型以及細胞實驗當中我們發(fā)現(xiàn),左旋樟腦能通過調控miR-125a靶向Cadm2對腦缺血再灌注損傷的保護作用,是通過靶向抑制miR-125a的表達,使Cadm2蛋白上調保護神經(jīng)突起。左旋樟腦能通過調控miR-125a抑制細胞凋亡和自噬保護腦缺血再灌注損傷,此研究為左旋樟腦在腦缺血的預防和治療上提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective To study the protective effects of L - camphor on cerebral ischemia - reperfusion injury . The results showed that L - camphor could inhibit the expression of caspase - 3 and self - autophagy - related protein ( LC3 , P62 ) in the animal model of cerebral ischemia - reperfusion .
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

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本文編號：2080015