本文選題：黃柏苷 + 綠原酸　； 參考：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：癌癥一直是人類(lèi)健康的殺手,近年來(lái),肺癌發(fā)病率僅次于乳腺癌和前列腺癌,已成為導(dǎo)致癌癥死亡的主要原因。黃柏苷和綠原酸是黃檗樹(shù)葉中的有效成分,作為天然產(chǎn)物,二者毒性較低且副作用少。本研究旨在探究黃柏苷和綠原酸的抗腫瘤活性及其分子機(jī)制,為癌癥治療尋找新型方案。利用不同濃度的黃柏苷和綠原酸分別處理A549細(xì)胞48小時(shí),通過(guò)MTT法檢測(cè)兩種藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率,并利用流式細(xì)胞術(shù)分析兩種藥物處理后A549細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡情況。同時(shí),通過(guò)比色法檢測(cè)并比較了用藥前后A549細(xì)胞內(nèi)SOD活力、GSH含量、MDA含量以及caspase 3活性的變化;利用JC-1染色法,通過(guò)熒光顯微鏡觀察了不同時(shí)間內(nèi)黃柏苷和綠原酸對(duì)A549細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的影響。此外,還通過(guò)免疫印跡分析了A549細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Bax及Bcl-2的表達(dá)水平。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),藥物濃度為2000μM時(shí),黃柏苷對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為70.87%,綠原酸對(duì)細(xì)胞的抑制率為29.01%。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明,黃柏苷可以誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯在G2/M期,并引起84.32%的細(xì)胞發(fā)生凋亡,而綠原酸將A549細(xì)胞周期阻滯在了S期,并造成30.10%的細(xì)胞發(fā)生凋亡。熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,在24小時(shí)內(nèi),黃柏苷和綠原酸均能夠降低A549細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位。此外,黃柏苷可以導(dǎo)致A549細(xì)胞內(nèi)SOD活力下降50%,GSH含量降低30%,MDA含量增加60%,但綠原酸對(duì)此并無(wú)顯著影響。而且,黃柏苷和綠原酸分別將A549細(xì)胞內(nèi)caspase 3活性提高了31%和25%。免疫印跡結(jié)果表明,黃柏苷將細(xì)胞內(nèi)Bax/Bcl-2水平上調(diào)為對(duì)照組的33倍,綠原酸則將Bax/Bcl-2水平上調(diào)為對(duì)照組的1.8倍。本研究發(fā)現(xiàn),黃柏苷和綠原酸均可以通過(guò)阻滯細(xì)胞周期,損傷細(xì)胞遺傳物質(zhì),上調(diào)Bax因子的表達(dá),同時(shí)下調(diào)Bcl-2因子的表達(dá),并且激活caspase 3進(jìn)而誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Cancer has always been the killer of human health. In recent years, the incidence of lung cancer is second only to breast cancer and prostate cancer, which has become the main cause of cancer death. Yellow cyperidin and Lv Yuan acid are effective components in the leaves of Berberis berberis. As a natural product, they are less toxic and have less side effects. The aim of this study was to explore the anti-tumor activity and molecular mechanism of berberine and Lv Yuan acid in order to find a new regimen for cancer treatment. A549 cells were treated with different concentrations of yellow cyperidin and Lv Yuan acid for 48 hours. The inhibition rate of the two drugs on A549 cell growth was detected by MTT assay. The cell cycle distribution and apoptosis of A549 cells were analyzed by flow cytometry. At the same time, the changes of SOD content and caspase 3 activity in A549 cells before and after treatment were detected and compared by colorimetry, and JC-1 staining was used to detect and compare the changes of GSH content and caspase 3 activity in A549 cells. The effects of flavin and Lv Yuan acid on mitochondrial membrane potential of A549 cells were observed by fluorescence microscope. In addition, the expression of apoptosis-related protein Bax and Bcl-2 in A549 cells was analyzed by Western blot. The results of MTT assay showed that when the concentration was 2000 渭 M, the growth inhibition rate was 70.87 and the inhibition rate of Lv Yuan acid on A549 cells was 29.01 渭 M. The results of flow cytometry showed that flavin could induce cell cycle arrest in G _ 2 / M phase and induce apoptosis in 84.32% of the cells, while Lv Yuan acid blocked A549 cell cycle in S phase and caused 30.10% of cell apoptosis. Fluorescence microscopy showed that both flavin and Lv Yuan acid could decrease mitochondrial membrane potential in A549 cells within 24 hours. In addition, the SOD activity of A549 cells decreased by 50%, and the content of Lv Yuan increased by 60%, but Lv Yuan acid had no significant effect on it. Moreover, the activity of caspase 3 in A549 cells was increased by 31% and 25% respectively by flavin and Lv Yuan acid. The results of Western blotting showed that the intracellular Bax/Bcl-2 level was 33 times higher than that of the control group, and the Bax/Bcl-2 level of Lv Yuan acid was 1.8-fold higher than that of the control group. In this study, it was found that both flavin and Lv Yuan acid could inhibit cell cycle, damage genetic material, up-regulate the expression of Bax factor, down-regulate the expression of Bcl-2 factor, and activate caspase 3 to induce apoptosis of A549 cells.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：1990253