本文選題：RNA干擾 + 食管腺癌　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:目前對食管癌癥患者的治療多采取以手術(shù)、放化療等為主的綜合治療,但是化療藥物療效較差、毒副作用大,治療效果不甚理想。近年來隨著分子腫瘤學(xué)的快速發(fā)展,腫瘤的靶向治療越來越得到人們的重視。Hedgehog(Hh)信號通路在胚胎期調(diào)控多種細(xì)胞的分化和生長,對維持成熟器官內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定及人類多種惡性腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Gli作為Hh信號通路下游調(diào)控中心,其異常激活可以啟動下游多種與腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。許多研究表明Gli基因通過多種機(jī)制可誘導(dǎo)多種癌癥的發(fā)生,并且與多種癌癥侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年來基因治療作為一種全新的治療模式顯示出良好的應(yīng)用前景,其中RNA干擾被公認(rèn)為是細(xì)胞調(diào)節(jié)基因表達(dá)的關(guān)鍵機(jī)制。既往針對食管腺癌Hh通路的研究多集中在上游靶點Smo,針對Hh通路下游核心靶點Gli表達(dá)調(diào)控研究極少,所以本研究通過siRNA抑制Gli在食管腺癌OE19細(xì)胞中的表達(dá),探討了Gli表達(dá)下調(diào)對食管腺癌細(xì)胞生長和侵襲能力的影響及可能的分子機(jī)制,旨在為臨床上食管腺癌的靶向治療提供新思路。方法:將不同濃度(50nmol/L和100nmol/L)Gli1、Gli2siRNA和空白對照siRNA轉(zhuǎn)染食管腺癌OE19細(xì)胞48h,實時熒光定量PCR法檢測食管腺癌OE19細(xì)胞Gli1和Gli2mRNA表達(dá)水平;免疫印跡試驗檢測siRNA轉(zhuǎn)染OE19細(xì)胞后Gli1、Gli2、Cyclin D1、Snail和E-cadherin蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測OE19細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期分布;Transwell侵襲實驗觀察siRNA抑制Gli表達(dá)后對食管腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。結(jié)果:1食管腺癌OE19細(xì)胞Gli1mRNA和Gli2mRNA的表達(dá)將Gli1和Gli2siRNA組檢測數(shù)據(jù)與control組(空白對照siRNA)相比較,Gli1siRNA中siRNA1mRNA和siRNA2mRNA較control組均顯著降低,三組方差分析,差異比較有統(tǒng)計學(xué)意義(F=113.134,P=0.000),siRNA1mRNA與control比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000),siRNA2mRna與control比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.000),sirna1mrna與sirna2mrna比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.033);gli2sirna中sirna1mrna和sirna2mrna較control組均顯著降低,三組方差分析,差異比較有統(tǒng)計學(xué)意義(f=262.329,p=0.000),sirna1mrna與control比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.000),sirna2mrna與control比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.000),sirna1mrna與sirna2mrna比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.021)。2食管腺癌oe19細(xì)胞中蛋白表達(dá)westernblot結(jié)果表明:gli1蛋白表達(dá)各組間有顯著性差異(f=1583.808,p=0.000);gli2蛋白表達(dá)各組間有顯著性差異(f=529.058,p=0.000);snail蛋白表達(dá)各組間有顯著性差異(f=1201.971,p=0.000);e-cadherin蛋白表達(dá)各組間有顯著性差異(f=1742.273,p=0.000)cyclind1蛋白表達(dá)各組間有顯著性差異(f=677.638,p=0.000);其中經(jīng)sirna1處理細(xì)胞后gli1(p=0.000)、gli2(p=0.000)、snail(p=0.000)和cyclind1(p=0.000)蛋白表達(dá)均顯著低于control組,e-cadherin(p=0.000)蛋白表達(dá)高于control組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;與control組相比sirna2處理組gli1(p=0.000)、gli2(p=0.000)、snail(p=0.000)和cyclind1(p=0.000)蛋白表達(dá)均顯著降低,e-cadherin(p=0.000)蛋白表達(dá)增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)sirna2處理細(xì)胞后gli1(p=0.000)、gli2(p=0.000)、snail(p=0.000)和cyclind1(p=0.000)蛋白表達(dá)均低于sirna1組,e-cadherin(p=0.000)蛋白表達(dá)高于sirna1組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;3細(xì)胞周期研究結(jié)果g0/g1期control組細(xì)胞為(42.62±2.25)%,sirna1組細(xì)胞為(58.68±2.43)%、sirna2組細(xì)胞為(67.39±3.21)%,三組比較方差分析結(jié)果(f=66.804,p=0.000),sirna1組顯著高于control組,差異比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.000),sirna2組高于control組,差異比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.000),sirna2組顯著高于sirna1組(p=0.000);s期control組細(xì)胞為(45.38±2.02)%,sirna1組細(xì)胞為(39.51±2.72)%、sirna2組細(xì)胞為(28.45±2.04)%,三組比較方差分析結(jié)果(f=42.525,p=0.000),sirna1組低于control組(p=0.032),sirna2組低于control組(P=0.000),SiRNA2組顯著低于SiRNA1組(P=0.000),差異比較有統(tǒng)計學(xué)意義。G2/M期Control組細(xì)胞為(6.00±1.96)%,siRNA1組細(xì)胞為(5.81±2.01)%、SiRNA2組細(xì)胞為(5.16±2.34)%,三組比較方差分析結(jié)果(F=0.131,P=0.879),差異比較無統(tǒng)計學(xué)意義。4細(xì)胞侵襲能力實驗結(jié)果各組間比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義(F=797.079,P=0.000):與Control組穿膜細(xì)胞相對數(shù)表達(dá)量(1.00±0.01)比較,SiRNA1組穿膜細(xì)胞數(shù)相對表達(dá)量(0.72±0.01)明顯減少(P=0.000),SiRNA2組穿膜細(xì)胞數(shù)相對表達(dá)量(0.33±0.01)較control明顯減少(P=0.000)。SiRNA2組穿膜細(xì)胞數(shù)相對表達(dá)量(0.33±0.01)較SiRNA1(0.72±0.01)組明顯減少(P=0.000)。結(jié)論:1 si RNA可以明顯抑制食管腺癌OE19細(xì)胞中GlimRNA的表達(dá),并且具有劑量依賴性。2 Hedgehog通路與食管腺癌生長增殖和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程存在密切關(guān)系,當(dāng)抑制Hedgehog通路時,其生長增殖和EMT過程被明顯抑制。3 Gli在食管腺癌的生長轉(zhuǎn)移中具有重要的作用,SiRNA通過下調(diào)Gli1和Gli2表達(dá)可抑制食管腺癌細(xì)胞周期分布和EMT能力,這可能與Gli調(diào)控CyclinD1、Snail和E-cadherin等蛋白變化有關(guān),Gli有望成為抑制食管腫瘤轉(zhuǎn)移的有效新靶點。
[Abstract]:Objective : To study the effect of Gli gene on the expression of Gli1 , Gli2 , Cyclin D1 and E - cadherin in esophageal adenocarcinoma . The expression of E - cadherin ( p = 0.000 ) , gli2 ( p = 0.000 ) , sarcoma ( p = 0.000 ) and cyclin d1 ( p = 0.000 ) were significantly lower than that in control group ( f = 678.638 , p = 0.000 ) . The expression of Gli1 and Gli2 in SiRNA2 group was significantly lower than that in control group ( P = 0.000 ) .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1980667