本文選題：枳實(shí) + 枳殼�。� 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：枳實(shí)為蕓香科植物酸橙Citrus aurantuL.及其栽培變種或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。枳殼為蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)。枳實(shí)、枳殼中化學(xué)成分復(fù)雜多樣,包括黃酮類(lèi),香豆素類(lèi)、生物堿類(lèi)、揮發(fā)類(lèi)、檸檬苦素類(lèi)。黃酮和香豆素為枳實(shí)和枳殼中的主要化學(xué)成分,具有抗氧化,抗過(guò)敏,抗炎,抗腫瘤,升壓,強(qiáng)心,促進(jìn)胃腸功能等作用。這些化合物溶解度及含量存在較大差異,且樣品中其他共存雜質(zhì)成分存在較大的干擾,為其樣品的制備及準(zhǔn)確定量帶來(lái)極大的挑戰(zhàn)。目前中藥主要以某一個(gè)或者少數(shù)幾個(gè)指標(biāo)進(jìn)行提取工藝篩選,但是中藥是一個(gè)復(fù)雜的體系,其主要通過(guò)整體化合物的吸收發(fā)揮作用。因此本文首先采用固相萃取法對(duì)枳實(shí)和枳殼進(jìn)行純化和富集,分別得到二者的總的活性黃酮和香豆素化合物,對(duì)其化合物進(jìn)行檢測(cè)并建立不同品種枳實(shí)的指紋圖譜研究。進(jìn)一步采用PAMPA模型,從單體、中藥整體體外吸收兩個(gè)層面對(duì)枳實(shí)和枳殼進(jìn)行提取工藝的快速篩選研究。以探索枳實(shí)與枳殼中有效成分的差異及腸吸收可能存在的機(jī)制,為枳實(shí)和枳殼質(zhì)量評(píng)價(jià)方法提供重要依據(jù),同時(shí)從生物利用度角度為枳實(shí)枳殼樣品提取工藝的制備提供新方法。1.枳實(shí)枳殼中活性化合物的純化富集與檢測(cè)1.1枳實(shí)枳殼提取工藝的研究制訂合理的提取工藝,是保證療效的關(guān)鍵。為了確定有效成分最佳提取工藝,首先比較了提取方式回流與超聲的提取效果,進(jìn)一步以析因設(shè)計(jì)進(jìn)行提取關(guān)鍵因素篩選,最后以關(guān)鍵因素甲醇濃度、溶劑倍數(shù)、提取時(shí)間為考察因素,采用采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化提取工藝。以枳殼中16個(gè)活性成分圣草次苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮素、柚皮素、野漆樹(shù)苷、川陳皮素、甜橙黃酮、5-去甲川陳皮素、橘皮素、7-OH香豆素、佛手柑內(nèi)酯、橙皮油素、佛手柑素為指標(biāo)�？紤]含量高低懸殊,通過(guò)多指標(biāo)綜合評(píng)分法來(lái)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,評(píng)價(jià)不同提取工藝的提取效果。確定最佳提取工藝為:采用超聲提取法,以125倍量75%甲醇作為提取溶劑,提取時(shí)間為30 min。1.2枳實(shí)枳殼固相萃取方案的優(yōu)化枳實(shí)、枳殼中化合物種類(lèi)較多,成分復(fù)雜,溶解度及含量存在較大差異。有些成分的含量比較低,容易受樣品其他雜質(zhì)成分的干擾,影響其準(zhǔn)確定量。因此借助固相萃取法操作簡(jiǎn)便、集提取與分離于一體,且對(duì)微量成分具有較好的除雜與富集作用等優(yōu)勢(shì),將其應(yīng)用于枳實(shí)與枳殼的富集與純化。以枳實(shí)和枳殼中20種不同結(jié)構(gòu)類(lèi)型的黃酮及香豆素為研究對(duì)象,從固相萃取小柱填料的篩選、穿透體積、淋洗溶劑及洗脫溶劑、洗脫體積對(duì)固相萃取條件進(jìn)行優(yōu)化,篩選出最佳純化與富集方案為:固相萃取小柱以Strata-X填料,以2mL甲醇和5mL水平衡對(duì)小柱進(jìn)行前處理,穿透體積為23mL,上樣后以2 mL 30%的甲醇淋洗雜質(zhì),再以10 mL 100%的甲醇洗脫目標(biāo)成分。結(jié)果顯示通過(guò)固相萃取法,枳實(shí)枳殼提取物中總黃酮及香豆素化合物的含量提高了 35.55%—68.48%。提示固相萃取法具有很好的純化富集作用。1.3枳實(shí)枳殼的含量測(cè)定研究固相萃取法優(yōu)化方案確定后,我們將其應(yīng)用于50批次不同品種的枳實(shí)與枳殼的含量測(cè)定及分類(lèi)鑒別中�？紤]待測(cè)成分化學(xué)類(lèi)型多樣性,采用HPLC多波長(zhǎng)切換法進(jìn)行檢測(cè),建立了枳實(shí)枳殼中20種黃酮和香豆素類(lèi)成分快速檢測(cè)及識(shí)別方法。線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、加樣回收率、方法學(xué)考察結(jié)果顯示,該方法穩(wěn)定可靠,可以作為枳實(shí)枳殼中20種化合物的含量測(cè)定方法。結(jié)果表明在同品種不同生長(zhǎng)階段枳實(shí)和枳殼中各類(lèi)化學(xué)成分,包括二氫黃酮、多甲氧基黃酮、香豆素的含量,枳實(shí)均高于枳殼。而在不同品種枳實(shí)中新橙皮苷、柚皮苷在分布和含量上均呈現(xiàn)較大的差異。借助多元統(tǒng)計(jì)分析軟件,我們實(shí)現(xiàn)了對(duì)不同品種的枳實(shí)與同品種不同生長(zhǎng)階段的枳殼進(jìn)行分類(lèi)鑒別�？偟膩�(lái)說(shuō),固相萃取法在枳實(shí)枳殼分類(lèi)鑒別的前處理方面具有很好的應(yīng)用價(jià)值。1.4不同品種指紋圖譜研究采用HPLC-DAD方法建立18個(gè)批次酸橙枳實(shí)以及10個(gè)批次甜橙枳實(shí)的指紋圖譜,通過(guò)對(duì)照品對(duì)照和紫外圖譜指認(rèn)了 17個(gè)色譜峰并對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A)軟件進(jìn)行指紋圖譜分析,進(jìn)一步通過(guò)SIMCA-P 13.0軟件對(duì)17個(gè)確認(rèn)的成分含量進(jìn)行最小二乘法判別分析,確定區(qū)分酸橙枳實(shí)與甜橙枳實(shí)的差異性標(biāo)記物。結(jié)果表明新橙皮苷、柚皮苷、野漆樹(shù)苷、橘皮素、橙皮素、5-去甲川陳皮素、橙皮油素,這些成分是造成不同品種枳實(shí)質(zhì)量之間差異貢獻(xiàn)較大的成分,對(duì)不同品種枳實(shí)的聚類(lèi)分析具有顯著性影響。該方法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性,為枳實(shí)的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供依據(jù)。2.枳實(shí)、枳殼活性化學(xué)成分的PAMPA快速篩選研究為探討枳實(shí)枳殼中活性化合物的吸收情況及腸吸收可能存在的機(jī)制,為枳實(shí)枳殼的藥物制備提供新方法,進(jìn)行了以下研究。2.1 PAMPA模型的建立與質(zhì)量評(píng)價(jià)采用大豆卵磷脂溶解在十二烷中作為膜材料在96孔過(guò)濾板上建立人工膜以模擬小腸上皮細(xì)胞膜,通過(guò)膜體積和濃度的優(yōu)化,采用外觀觀察、熒光素鈉檢漏及四種陽(yáng)性對(duì)照藥普萘洛爾、卡馬西平、華法林、呋塞米評(píng)價(jià)三種方式進(jìn)行膜質(zhì)量的考察方法。結(jié)果顯示:采用濃度為5%的大豆卵磷脂,建立體積為10 μL的人工膜結(jié)構(gòu)完整,質(zhì)量可靠,可以作為PAMPA模型進(jìn)行快速篩選研究。2.2 PAMPA模型上單體化合物的篩選研究對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的枳實(shí)、枳殼中存在的43個(gè)不同結(jié)構(gòu)類(lèi)型的單體化學(xué)成分進(jìn)行PAMPA篩選研究。借助HPLC-QqQ-MS/MS法的優(yōu)勢(shì),實(shí)現(xiàn)了對(duì)43個(gè)成分在25 min內(nèi)的快速分析,并計(jì)算各單體化合物在高、中、低三個(gè)濃度梯度下的有效滲透系數(shù)值。結(jié)果顯示有效滲透系數(shù)值是化合物的固有性質(zhì),與濃度無(wú)關(guān)。不同結(jié)構(gòu)類(lèi)型的有效滲透系數(shù)值表明香豆素類(lèi)成分,多甲氧基黃酮類(lèi),二氫黃酮苷元,黃酮苷元及檸檬苦素類(lèi)成分的小腸吸收較好,而糖苷類(lèi)成分吸收較差。2.3 PAMPA模型上中藥整體提取物的篩選研究中藥臨床用藥以整體發(fā)揮療效,因此采用PAMPA模型建立中藥整體的篩選研究具有重要意義。采用不同溶劑提取、固相萃取法進(jìn)行純化處理,得到枳實(shí)、枳殼的不同提取物組分,用于PAMPA模型的篩選研究。結(jié)果表明在中藥整體提取物中共存成分對(duì)吸收有一定的影響,某些成分如橙皮苷、野漆樹(shù)苷、地奧司明,表現(xiàn)出吸收促進(jìn)的作用,可能與增加溶解度有關(guān)。中藥整體提取物經(jīng)過(guò)固相萃取法純化后,吸收進(jìn)一步增強(qiáng)。這建小結(jié):本文主要進(jìn)行了兩個(gè)方面的工作:1.采用固相萃取法確立了枳實(shí)枳殼樣品中酚性化學(xué)成分的純化與富集方案,結(jié)合HPLC-DAD多波長(zhǎng)切換法對(duì)不同品種枳實(shí)與同品種不同生長(zhǎng)階段枳實(shí)和枳殼進(jìn)行分類(lèi)鑒別的研究。結(jié)果顯示不同品種枳實(shí)之間化學(xué)成分在質(zhì)上存在較大差異,而同品種不同生長(zhǎng)階段之間枳實(shí)與枳殼主要存在量上的差異,隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),酚性化學(xué)成分包括黃酮類(lèi),二氫黃酮類(lèi),多甲氧基黃酮類(lèi)以及香豆素類(lèi),含量均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì),臨床用藥枳實(shí)藥效比枳殼迅猛,其功效的差異可能與含量的差異有關(guān)。此研究為枳實(shí)枳殼臨床合理用藥提供依據(jù)。2.采用PAMPA體外吸收模型對(duì)枳實(shí)枳殼中單體及整體提取物的快速篩選研究。單體化合物研究顯示化合物的吸收滲透系數(shù)值是化合物的固有屬性,與濃度無(wú)關(guān),且吸收的強(qiáng)弱與化合物的脂溶性呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。中藥作為一個(gè)整體其內(nèi)部成分之間存在相互作用,影響其吸收。通過(guò)固相萃取法純化處理可以除去一些干擾吸收的組分,促進(jìn)化合物的吸收。提示在中藥提取制備中既要考慮內(nèi)部化合物之間的配伍作用,又要對(duì)其進(jìn)行提純,對(duì)一些干擾組分進(jìn)行處理,使中藥在一個(gè)比較適當(dāng)?shù)募兌确秶鷥?nèi)發(fā)揮其最佳吸收,提高其生物利用度。此研究從生物利用度的角度為中藥制備提供新方法。
[Abstract]:A method for extracting Fructus Aurantii Immaturus from Fructus Aurantii Immaturus and Fructus Aurantii may be selected from Fructus Aurantii Immaturus and Fructus Aurantii . A method for the determination of 20 kinds of flavonoids and coumarin from Fructus Aurantii Immaturus and Fructus Aurantii by means of multi - index comprehensive scoring method is used to determine the content of 20 kinds of flavone and coumarin in Fructus Aurantii Immaturus and Fructus Aurantii . A new method for the determination of immature bitter orange in immature bitter orange was carried out . The results showed that the method has good precision , stability and repeatability , and it can be used as a new method for the quality control and evaluation of immature bitter orange . In this paper , a new method for the determination of the chemical components of Fructus Aurantii Immaturus and Fructus Aurantii by solid - phase extraction is studied . The results show that the absorption and permeability coefficient of Fructus Aurantii Immaturus is different from that of Fructus Aurantii .
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1979797