本文選題：食管鱗癌 + miR-199a-3p��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的1.探討miR-199a-3p對食管鱗癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及可能的分子機(jī)制。2.探討下調(diào)Rictor表達(dá)后PI3K/AKT/m TOR通路抑制劑對食管鱗癌細(xì)胞增殖和凋亡影響的變化情況。研究方法1.q RT-PCR法檢測miR-199a-3p在五株食管鱗癌細(xì)胞TE1、ECa109、EC9706、KYSE450、KYSE790(其中TE1和EC9706屬于低分化細(xì)胞株,ECa109、KYSE450和KYSE790屬于高分化細(xì)胞株)中的表達(dá)情況。2.利用si RNA-MateTM轉(zhuǎn)染試劑將人工合成的miR-199a-3p的模擬物mimics轉(zhuǎn)染至食管鱗癌細(xì)胞ECa109、EC9706、KYSE450中,q RT-PCR法分別檢測轉(zhuǎn)染前后miR-199a-3p在三株細(xì)胞中的表達(dá)情況。分別采用克隆形成實驗、CCK-8法及流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后miR-199a-3p對食管鱗癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響。3.分別用Western blots和q RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染前后三株食管鱗癌細(xì)胞中m TORC1信號通路相關(guān)因子m TOR、Raptor、p70S6K蛋白及m RNA的表達(dá)情況,凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2以及自噬相關(guān)蛋白p62和LC3I/II的表達(dá)情況。4.用m TORC1抑制劑RAD001(30μM)處理三株食管鱗癌細(xì)胞,q RT-PCR法檢測加藥前后三株細(xì)胞中miR-199a-3p的表達(dá)情況。5.用PI3K/AKT/m TOR通路抑制劑處理篩選的穩(wěn)定表達(dá)Rictor-sh RNA載體的ECa109細(xì)胞及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞,分別采用克隆形成實驗和流式細(xì)胞術(shù)檢測下調(diào)Rictor表后細(xì)胞增殖和凋亡的變化情況。結(jié)果1.miR-199a-3p在五株食管鱗癌細(xì)胞中均有表達(dá)但其表達(dá)水平無顯著性差異,說明其表達(dá)與細(xì)胞分化程度無明顯相關(guān)性。2.與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染miR-199a-3p mimics陰性對照組的細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染miR-199a-3p mimics的三株食管鱗癌細(xì)胞中miR-199a-3p的表達(dá)水平均顯著升高,且三株細(xì)胞的克隆形成能力顯著降低,細(xì)胞增殖明顯減慢,細(xì)胞凋亡數(shù)顯著增加。3.三株食管鱗癌細(xì)胞中,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染miR-199a-3p mimics陰性對照的細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染miR-199a-3p mimics的細(xì)胞中m TOR、Raptor、p70S6K的蛋白和m RNA表達(dá)水平均顯著降低,抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平顯著降低,自噬蛋白p62表達(dá)水平明顯降低,LC3I/II蛋白表達(dá)水平明顯升高。4.三株食管鱗癌細(xì)胞中,與對照組相比,加RAD001的細(xì)胞中miR-199a-3p表達(dá)量無顯著性差異。5.食管鱗癌ECa109細(xì)胞中,與未處理組相比,Rictor表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞用PI3K/AKT/m TOR通路抑制劑處理后,細(xì)胞克隆形成數(shù)均明顯減少,細(xì)胞凋亡數(shù)均明顯增加。結(jié)論1.miR-199a-3p能夠抑制食管鱗癌細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與m TORC1/p70S6K信號通路和細(xì)胞自噬有關(guān)。2.下調(diào)Rictor表達(dá)后能增強(qiáng)PI3K/AKT/m TOR信號通路抑制劑對細(xì)胞增殖及凋亡的作用效果。
[Abstract]:Objective 1. to investigate the effect of miR-199a-3p on the proliferation and apoptosis of esophageal squamous cell carcinoma cells and the possible molecular mechanism.2. to investigate the changes of the effect of PI3K/AKT/m TOR pathway inhibitor on the proliferation and apoptosis of esophageal squamous cell carcinoma cells after the downregulation of Rictor. The 1.q RT-PCR method was used to detect TE1, ECa109, EC of miR-199a-3p in five esophageal squamous cell carcinoma cells. 9706, KYSE450, KYSE790 (of which TE1 and EC9706 belong to low differentiated cell lines, ECa109, KYSE450 and KYSE790 belong to highly differentiated cell lines).2. using Si RNA-MateTM transfection reagent to transfect the synthetic miR-199a-3p analogue mimics to esophageal squamous cell carcinoma cells. The expression of miR-199a-3p in three cells. The effects of miR-199a-3p on the proliferation and apoptosis of esophageal squamous cell carcinoma were detected by clones, CCK-8 and flow cytometry, and.3. was used to detect m TORC1 signaling pathway related factor M TOR in three esophageal squamous cell carcinoma cells before and after transfection, respectively. Expression of ptor, p70S6K protein and m RNA, apoptosis related protein Bcl-2, and expression of autophagy related protein p62 and LC3I/II.4. using M TORC1 inhibitor RAD001 (30 micron M) to treat three esophageal squamous cell carcinoma cells. The ECa109 cells and untransfected cells expressed the Rictor-sh RNA carrier, and the cell proliferation and apoptosis were detected by clone formation and flow cytometry. The results showed that 1.miR-199a-3p was expressed in five esophageal squamous cell carcinoma cells, but the expression was not significantly different, indicating the expression and cell expression of the cells. There was no significant correlation between the degree of differentiation and the expression of miR-199a-3p in three esophageal squamous cell carcinoma cells transfected with miR-199a-3p mimics, compared with those in the untransfected group and the cells transfected with miR-199a-3p mimics negative control group, and the expression level of miR-199a-3p was significantly increased in three cells transfected with miR-199a-3p mimics, and the clone formation ability of the cells was significantly reduced, the cell proliferation slowed down, and the cell apoptosis was significant. The expression level of M TOR, Raptor, p70S6K protein and m RNA in miR-199a-3p mimics cells decreased significantly, and the expression level of anti apoptotic protein Bcl-2 was significantly reduced and the expression level of autophagic protein decreased significantly in.3. three esophageal squamous cell carcinoma cells, compared with those in the untransfected group and the cells transfected with the negative control of the miR-199a-3p mimics. The expression level of /II protein was significantly increased in.4. three esophageal squamous cell carcinoma cells. Compared with the control group, there was no significant difference in the expression of miR-199a-3p in the ECa109 cells of.5. esophageal squamous cell carcinoma with RAD001. Compared with the untreated group, the number of cell clones decreased significantly after the Rictor down-regulation cells were treated with the PI3K/AKT/m TOR pathway inhibitor. The number of apoptotic cells increased significantly. Conclusion 1.miR-199a-3p can inhibit the proliferation of esophageal squamous cell carcinoma cells and induce apoptosis. The mechanism may enhance the effect of PI3K/AKT/m TOR signaling pathway inhibitor on cell proliferation and apoptosis after the downregulation of Rictor expression by M TORC1/p70S6K signaling pathway and autophagy related.2..
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

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本文編號：1945570