本文選題：腦膜癌病 + 小腦延髓池��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:腦膜癌病(Leptomeningeal carcinomatosis,LC)是原發(fā)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,局灶或彌漫浸潤(rùn)軟腦膜及蛛網(wǎng)膜下腔,并播散至腦脊液,是惡性腫瘤中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移的一種較少見類型,原發(fā)病灶常為肺癌,腺癌是常見的組織學(xué)類型。近年來,腦膜癌病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì),而目前該病的治療效果尚不理想,尚缺乏針對(duì)原發(fā)腫瘤不同來源及病理特征的有效治療手段。為進(jìn)一步探索相關(guān)治療靶點(diǎn),以及評(píng)估相關(guān)治療藥物及方法的有效性及安全性,首先需要建立穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。目前腦膜癌病動(dòng)物模型的研究報(bào)道較少,國(guó)外研究者較早通過小腦延髓池(Cisterna magna,CM)穿刺進(jìn)行的腦膜癌病大鼠模型的實(shí)驗(yàn)性研究及鞘內(nèi)給藥方式需要較復(fù)雜的操作過程。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)早期腦膜癌病動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行改進(jìn),旨在建立操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性較好的腦膜癌病小鼠模型,并進(jìn)一步探討模型小鼠腦膜腫瘤中血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)的表達(dá)情況。方法:1小鼠小腦延髓池注射法雌性6-8周齡C57BL/6小鼠35只,其中20只隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,每組10只,分別經(jīng)小腦延髓池穿刺注射PBS或Lewis肺癌細(xì)胞(Lewis Lung carcinoma cell,LLC)懸液(1.5×105個(gè)細(xì)胞)7.5μl,觀察評(píng)估小腦延髓池注射后兩組小鼠體重隨時(shí)間變化及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀表現(xiàn);15只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=3)、PBS組(n=6)和模型組(n=6),當(dāng)小鼠癥狀表現(xiàn)明顯時(shí),4%多聚甲醛灌流固定取材,小鼠腦和脊髓組織用于組織病理學(xué)蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE)及免疫組化分析。2石蠟切片HE染色法4%多聚甲醛固定后的小鼠腦和脊髓組織標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋后制成蠟塊,用Leica RM2235石蠟切片機(jī)切片,切片厚度為5μm。切片經(jīng)脫蠟后進(jìn)行常規(guī)HE染色,組織病理學(xué)觀察軟腦(脊)膜病理改變。3免疫組織化學(xué)法采用免疫組化方法對(duì)模型組及PBS組小鼠橋腦部位的軟腦膜進(jìn)行CD31染色分析,評(píng)估腦膜癌病血管生成。結(jié)果:1小鼠經(jīng)小腦延髓池緩慢注射10μl稀釋的墨汁溶液后,解剖小鼠腦及脊髓,可見墨汁溶液主要分布于小腦延髓池、腹側(cè)腦池。2小腦延髓池注射LLC細(xì)胞或PBS后兩組小鼠行為學(xué)觀察(1)小腦延髓池注射前對(duì)照組小鼠體重為(18.68±1.08)g,實(shí)驗(yàn)組小鼠體重為(19.43±0.86)g,兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.101)。小腦延髓池注射PBS或LLC細(xì)胞懸液后第1天,兩組小鼠體重均下降明顯,對(duì)照組小鼠體重為(17.02±1.63)g,實(shí)驗(yàn)組小鼠體重為(17.08±1.06)g,兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.921)。第2~3天,兩組小鼠體重水平仍較低,較前變化不大。第4~10天,兩組小鼠體重均緩慢回升,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。第11天開始,對(duì)照組小鼠體重仍在逐漸增加,而實(shí)驗(yàn)組小鼠體重開始進(jìn)行性下降直至死亡,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.029)。實(shí)驗(yàn)組小鼠均在40天內(nèi)死亡,中位生存時(shí)間為32.5天,而對(duì)照組小鼠均至觀察終點(diǎn)40天仍存活,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.0001)。(2)實(shí)驗(yàn)組小鼠小腦延髓池注射LLC細(xì)胞后癥狀出現(xiàn)在第10~16天,平均為(13±2)天。全部實(shí)驗(yàn)組(n=10)小鼠均表現(xiàn)為活動(dòng)明顯減少,全身狀態(tài)差(10/10);其中6只小鼠病程中出現(xiàn)了弓背姿勢(shì)(6/10);5只小鼠出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)(5/10);2只小鼠出現(xiàn)拎起尾巴旋轉(zhuǎn)的表現(xiàn)(2/10)。而對(duì)照組小鼠均活動(dòng)正常,未出現(xiàn)上述異常表現(xiàn)。3蘇木精-伊紅染色顯示模型組小鼠癥狀表現(xiàn)明顯時(shí)其腦與脊髓軟膜組織病理可見腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn),以腦基底部及脊髓頸段多見。4免疫組化結(jié)果顯示CD31在模型組及PBS組小鼠橋腦部位軟腦膜的表達(dá)明顯不同,實(shí)驗(yàn)組血管計(jì)數(shù)約為(12.83±3.01)mm-1,對(duì)照組為(6.08±1.02)mm-1,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.021)。結(jié)論:1通過小腦延髓池注射Lewis肺癌細(xì)胞可成功建立肺癌腦膜癌病小鼠模型,實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、重復(fù)性較好。2腦膜癌病模型小鼠病程中可出現(xiàn)體重進(jìn)行性下降、活動(dòng)明顯較少、全身狀態(tài)差、弓背姿勢(shì)、步態(tài)不穩(wěn)、拎起尾巴時(shí)旋轉(zhuǎn)等異常癥狀表現(xiàn),但各小鼠表現(xiàn)不盡相同。3腦膜癌病模型小鼠的軟腦膜部位CD31的表達(dá)明顯增多,表明腦膜血管密度增多,提示新生微血管形成可能在腦膜癌病發(fā)展中起重要作用。
[Abstract]:Objective : To study the effect and safety of brain - membrane cancer in mice . The body weight of mice in the experimental group was significantly lower than that in the control group ( 18.68 鹵 1.08 ) g , and the body weight of the experimental group was ( 17.02 鹵 1 . 63 ) g . The weight of the mice in the experimental group was ( 17.02 鹵 1 . 63 ) g , and the body weight of the experimental group was ( 17.08 鹵 1.06 ) g . The mice in the experimental group had no statistical significance ( P = 0.029 ) . The results showed that the expression of CD31 in the model group and the control group was ( 12.83 鹵 3.01 ) mm - 1 and the control group was ( 6.08 鹵 1.02 ) mm - 1 .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.45;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1917693